鹿结核分枝杆菌MPB70蛋白的表达与免疫原性鉴定

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.12.008

《中国畜牧兽医》 ›› 2016, Vol. 43 ›› Issue (12): 3135-3140.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.12.008

鹿结核分枝杆菌MPB70蛋白的表达与免疫原性鉴定

王晓龙¹, 卢天成¹, 王秀然¹, 杨艳玲²

1. 吉林农业大学生命科学学院, 长春 130118;
2. 中国农业科学院特产研究所, 长春 130112

收稿日期:2016-05-12 出版日期:2016-12-20 发布日期:2016-12-22
通讯作者: 杨艳玲 E-mail:yangyanling12280@sina.com
作者简介:王晓龙(1991-),男,吉林榆树人,硕士生,研究方向:微生物资源开发与利用,E-mail:15004314273@163.com
基金资助:
吉林省科技攻关项目（20140204070NY）

Expression of MPB70 Protein and Identification the Immunogenicity of Deer Mycobacterium tuberculosis

WANG Xiao-long¹, LU Tian-cheng¹, WANG Xiu-ran¹, YANG Yan-ling²

1. College of Life Science, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China;
2. Institute of Special Animal and Plant Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Changchun 130112, China

Received:2016-05-12 Online:2016-12-20 Published:2016-12-22

摘要/Abstract

摘要：

本研究以分离的鹿结核分枝杆菌DNA为模板扩增免疫原性蛋白MPB70基因，获得约590 bp片段，并将其克隆，构建原核表达载体pET-30a-MPB70，将重组质粒转入大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导后纯化和SDS-PAGE分析，在20 ku处可见特异性蛋白条带。利用鹿结核阳性血清进行Western blotting鉴定，原核表达的融合蛋白可与鹿结核阳性血清抗体结合，并出现特异的免疫反应。该蛋白可作为特异性抗原进行鹿结核病的检测，从而为鹿结核病诊断方法的研究奠定基础。

关键词: 结核分枝杆菌; MPB70基因; 原核表达

Abstract:

In this study,the immunogenicity protein MPB70 gene was amplified from Mycobacterium tuberculosis genome DNA which separated from deer, and about 590 bp fragment was obtained. Then the fragment was cloned and constructed prokaryotic expression vector of pET-30a-MPB70, and the recombinant plasmid was put into E. coli BL21(DE3).Purified after IPTG induction, and analyzed by SDS-PAGE, a specificity protein band was observed at 20 ku. Using the deer serum positive of tuberculosis in Western blotting, the fusion protein could be combined with deer serum positive of tuberculosis antibody and arise specific immune response. The protein could be used as a specific antigen to test the deer tuberculosis. The study laid a foundation for further studying the deer tuberculosis appraisal method.

Key words: Mycobacterium tuberculosis; MPB70 gene; prokaryotic expression

中图分类号:

S852.61⁺8

王晓龙, 卢天成, 王秀然, 杨艳玲. 鹿结核分枝杆菌MPB70蛋白的表达与免疫原性鉴定[J]. 《中国畜牧兽医》, 2016, 43(12): 3135-3140.

WANG Xiao-long, LU Tian-cheng, WANG Xiu-ran, YANG Yan-ling. Expression of MPB70 Protein and Identification the Immunogenicity of Deer Mycobacterium tuberculosis[J]. , 2016, 43(12): 3135-3140.

参考文献

[1] 崔宝亮,陈利苹,张娈娈,等.结核分枝杆菌rv0199基因在耻垢分枝杆菌中的表达及检测[J].中国畜牧兽医,2014,41(7):9-13.
[2] Chen J Z,Su X D,Zhang Y,et al. Novel recombinant RD2-and RD11-encoded Mycobacterium tuberculosis antigens are potential candidates for diagnosis of tuberculosis infection in BCG-vaccinated individuals[J]. BMC Infectious Diseases,2010,10(1):876-885.
[3] 彭丽,罗永艾.结核病的实验室快速诊断[J].新医学,2005,36(6):359-361.
[4] 刘桂香,邵锡如,田登,等.应用DNA基因诊断白唇鹿结核杆菌的感染[J].医学动物防制,2002,18(6):293-294.
[5] 王春雨,杨莉,王全凯,等.吉林省鹿结核病的流行病学调查[J].中国畜牧兽医,2010,37(10):204-206.
[6] 郭设平,刘思国,张秀华,等.牛分枝杆菌抗原MPB70、MPB83和ESAT-6的融合表达及重组蛋白的初步应用[J].畜牧兽医学报,2006,37(7):676-680.
[7] 萨姆布鲁克,拉塞尔著.黄培堂等译.分子克隆实验指南(上、下册)[M].第3版.北京:化学工业出版社,2008.
[8] 贾浩,周晶,徐广贤,等.牛结核分枝杆菌MPB70蛋白分泌性载体的构建与蛋白表达[J].黑龙江畜牧兽医,2010,11:13-15.
[9] 明月,张文慧,张林波.结核杆菌诊断抗原的研究进展[J].畜牧与兽医,2015,47(10):141-144.
[10] 冯向辉,包永占,王建永,等.牛结核分枝杆菌重组多抗原表位基因的原核表达与鉴定[J].中国兽医学报,2011,31(1):55-58.
[11] 姜秀云,王春凤,何昭阳,等.牛分枝杆菌MPB70基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[J].中国预防兽医学报, 2005,27(6):486-489.
[12] 王志刚,神翠翠,彭金山,等.牛结核分枝杆菌MPB70基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[J].中国兽医杂志, 2010,46(5):3-4.
[13] 李玉梅,王全凯.北方三省区梅花鹿间二种疫病的血清学调查[J].中国动物检疫,2006,23(11):37-38.
[14] 付志金,王全凯,李思敏,等.吉林省梅花鹿副结核病、结核病及布鲁菌病血清流行病学调查[J].中国兽医学报, 2013,33(11):1696-1699.
[15] 王红光,汤德元,李春燕,等.梅花鹿暴发结核病的诊断[J].畜牧与兽医,2014,46(7):139.

鹿结核分枝杆菌MPB70蛋白的表达与免疫原性鉴定

Expression of MPB70 Protein and Identification the Immunogenicity of Deer Mycobacterium tuberculosis

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[1]	焦琳琳, 成玉婷, 吴庆国, 吴双, 吴植, 朱善元, 钱莺娟. 鸭坦布苏病毒Capsid蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2395-2402.
[2]	李灿, 李楚楚, 曾维, 张宁, 纪春晓, 陈韬. 猪RegⅢγ蛋白的重组表达及功能研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2414-2426.
[3]	宋越, 苏胜杰, 张帆, 白帆, 戴伶俐, 王娜, 王大伟, 杨茜雯, 赵世华, 张月梅. 溶血性曼氏杆菌截短型白细胞毒素的原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2479-2486.
[4]	张芳源, 蔺雅婷, 杨大为, 陈虎, 李桂梅, 单虎. 非洲猪瘟病毒P30蛋白原核表达及间接ELISA检测方法建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2012-2022.
[5]	王雪平, 张孝俊, 李晓月, 王国栋, 张福良, 宋玉伟, 张明亮, 马磊. 高致病性禽腺病毒血清4型Hexon蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2053-2060.
[6]	胡乐玉, 胡欣瑶, 李颖, 赵盛淼, 沈凤臻, 王长法, 李亮亮, 王彤彤, 任慧英. 德州驴HO-1基因生物信息学分析及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1499-1510.
[7]	王文婕, 茹鹏辉, 郁川, 杜付熙, 陈松彪, 尚珂, 张春杰, 程相朝. 猫细小病毒洛阳分离株VP2蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1511-1521.
[8]	刘家兴, 韩雪英, 张鑫茹, 邓嘉昕, 姚伦广, 刘阳坤. 携带猪流行性腹泻病毒抗原表位的铁蛋白纳米颗粒制备与免疫原性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1567-1574.
[9]	贾新月, 马静, 张艳艳, 马勋, 王正荣, 薄新文. 细粒棘球绦虫EGR-07243和EGR-07244基因生物信息学分析及原核表达[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 847-858.
[10]	章志涛, 李祥龙, 孔令丽, 罗雨昕, 王冬英. 大片形吸虫丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A的原核表达及不同时期表达水平分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1107-1117.
[11]	甘露, 郑会珍, 诺明达来, 刘燕, 金敏, 何文文, 温丽翠, 李永畅, 巴音查汗·盖力克. 伊氏锥虫伊犁株扩繁及其PFR基因克隆表达和生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 469-478.
[12]	吕双飞, 马勋, 王静, 孔翠莲, 寇丽君, 刘彩霞, 史唯地, 康立超, 任慧杰. 炭疽芽孢杆菌PA-LF1融合蛋白的原核表达及其反应原性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 674-683.
[13]	张凯, 张春平, 戈胜强, 孙春喜, 程杰, 伏春雨, 王刚, 牛星, 彭军. 非洲猪瘟病毒p22蛋白表达、多克隆抗体制备及间接ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 270-279.
[14]	朱丽霖, 王后坤, 陈雪阳, 刘晶, 梁雄燕, 方春, 杨玉莹. 鸡IFIT5对J亚群禽白血病病毒在DF-1细胞内复制的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 310-316.
[15]	王宇琛, 田广原, 周雅坪, 郭婷, 赵红梅, 孙雅婕, 赵逢淼, 卞宇晨, 于佳梁, 郝永清. BPIV3 NP蛋白的原核表达及其对BPIV3灭活疫苗免疫增强作用的研究[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(8): 3122-3130.