鸡传染性支气管炎病毒HH06株囊膜蛋白多克隆抗体制备及生物学功能检测

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.08.006

《中国畜牧兽医》 ›› 2016, Vol. 43 ›› Issue (8): 1967-1974.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.08.006

鸡传染性支气管炎病毒HH06株囊膜蛋白多克隆抗体制备及生物学功能检测

白妍, 赵蕾, 杜威威, 潘龙, 黄小丹, 杨贵君, 李广兴

东北农业大学动物医学学院, 哈尔滨 150030

收稿日期:2016-01-05 出版日期:2016-08-20 发布日期:2016-08-23
通讯作者: 李广兴 E-mail:ligx@neau.edu.cn
作者简介:白妍(1991-),女,黑龙江哈尔滨人,硕士生,研究方向:分子病理学,E-mail:bctdby@163.com
基金资助:
国家自然科学基金项目（31172295、31272569）

Preparation of Polyclonal Antibody against Recombinant E Protein of IBV HH06 Strain and Its Biological Function

BAI Yan, ZHAO Lei, DU Wei-wei, PAN long, HUANG Xiao-dan, YANG Gui-jun, LI Guang-xing

College of Veterinary Medicine, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China

Received:2016-01-05 Online:2016-08-20 Published:2016-08-23

摘要/Abstract

摘要：

采用RT-PCR方法扩增鸡传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus, IBV）HH06株E基因全长，经抗原性和亲水性分析，将E基因部分序列（193～327 bp）亚克隆于pET-32a（+）和PVAX1载体中。将阳性重组质粒pET-32a-E1转化E.coli Rosetta（DE3）感受态细胞，诱导表达获得大小约为23 ku的重组截短E1蛋白，Western blotting检测重组蛋白与IBV全病毒多克隆抗体能特异性反应。以纯化后的E1蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体，ELISA检测抗体效价达到2²⁰；Western blotting分析表明，E1多克隆抗体与重组表达蛋白具有良好的反应性；间接免疫荧光试验显示，多克隆抗体可检测到PVAX-E1转染Hela细胞表达的E1蛋白和感染鸡胚肾细胞（CEK）中的HH06株IBV，抗E蛋白多克隆抗体的制备为E蛋白功能的深入研究奠定了基础。

关键词: 传染性支气管病毒; 囊膜蛋白; 多克隆抗体; 免疫印迹试验; 间接免疫荧光试验

Abstract:

In this study,IBV HH06 complete E gene was firstly cloned and sequenced.According to the hydrophilicity and antigenic index analysis,its partial gene (193 to 327 bp) was subcloned into prokaryotic expression vector pET-32a(+) and eukaryotic expression vector PVAX1.The recombinant plasmid pET-32a-E1 was transformed into E.coli Rosetta (DE3) and induced with IPTG.The recombinant IBV truncated E1 protein with molecular weight of 23 ku was observed as expected.It could be recognized by positive IBV antisera in Western blotting with high reactivity.Then the purified recombinant protein was used as antigen for immunization of rabbit to prepare polyclonal antibody.Indirect ELISA showed that the titer of polyclonal antibody was 2²⁰,and it had high reactivity and specialty with recombinant protein.Furthermore,IFA test demonstrated that this polyclonal antibody could react with Hela cells transfected with PVAX-E1 plasmid and IBV-infected CEK cells.The IBV E polyclonal antibody obtained in this study laid a foundation for further functional research of E protein in IBV pathogenesis.

Key words: IBV; envelope protein; polyclonal antibody; Western blotting; indirect fluorescence antibody assay

中图分类号:

S852.65

白妍, 赵蕾, 杜威威, 潘龙, 黄小丹, 杨贵君, 李广兴. 鸡传染性支气管炎病毒HH06株囊膜蛋白多克隆抗体制备及生物学功能检测[J]. 《中国畜牧兽医》, 2016, 43(8): 1967-1974.

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鸡传染性支气管炎病毒HH06株囊膜蛋白多克隆抗体制备及生物学功能检测

Preparation of Polyclonal Antibody against Recombinant E Protein of IBV HH06 Strain and Its Biological Function

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