H6N1亚型禽流感病毒二重荧光RT-PCR检测方法的建立

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.02.006

›› 2016, Vol. 43 ›› Issue (2): 326-332.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.02.006

H6N1亚型禽流感病毒二重荧光RT-PCR检测方法的建立

罗思思, 谢芝勋, 谢志勤, 邓显文, 刘加波, 谢丽基, 黄莉, 黄娇玲, 曾婷婷, 张艳芳, 王盛

广西壮族自治区兽医研究所, 广西畜禽疫苗新技术重点实验室, 南宁 530001

收稿日期:2015-07-28 出版日期:2016-02-20 发布日期:2016-03-02
通讯作者: 谢芝勋 E-mail:xiezhixun@126.com
作者简介:罗思思(1985-),女,广西平南人,助理研究员,研究方向:畜禽病原分子生物学与防控,E-mail:luosisi2011@126.com
基金资助:
广西科技攻关重大专项 (14121003-4-2);广西水产畜牧兽医局科研项目(桂渔牧科201452001);广西科技攻关项目(桂科合14123001-8)

Establishment of a Duplex Real-time RT-PCR for Detection of H6N1 Subtype Avian Influenza Virus

LUO Si-si, XIE Zhi-xun, XIE Zhi-qin, DENG Xian-wen, LIU Jia-bo, XIE Li-ji, HUANG Li, HUANG Jiao-ling, ZENG Ting-ting, ZHANG Yan-fang, WANG Sheng

Guangxi Key Laboratory of Animal Vaccines and New Technology, Guangxi Veterinary Research Institute, Nanning 530001, China

Received:2015-07-28 Online:2016-02-20 Published:2016-03-02

摘要/Abstract

摘要： 根据GenBank中H6、N1亚型禽流感病毒(AIV)的HA、NA基因序列,设计2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针.经反应条件优化,本试验建立了检测H6N1亚型AIV的二重荧光RT-PCR方法.该法特异性强,只对H6亚型和N1亚型AIV进行特异性扩增,对其他H亚型AIV、N亚型AIV及新城疫病毒、传染性支气管炎病毒等病原体的检测均为阴性;该法敏感性好,对H6N1亚型AIV的检测限为100拷贝/μL.本试验建立的H6N1亚型AIV的二重荧光RT-PCR方法,具有快速、敏感、特异的优点,为H6N1亚型AIV的防控提供技术支撑.

关键词: 禽流感病毒; H6N1亚型; 二重荧光RT-PCR

Abstract: According to the sequences of HA and NA genes of H6 and N1 subtype avian influenza virus (AIV),two pairs of specific primers and two TaqMan probes with different fluorescence were designed.The duplex Real-time RT-PCR assay was developed and optimized to simultaneously detect H6 and N1 subtypes AIV in one reaction.The result showed that the specificity of this assay was high and only amplified H6 and N1 subtypes AIV,and was not cross-reactive with other H and N subtypes AIV,newcastle disease virus and infectious bronchitis virus.The detection limit of this assay was 100 copies/μL of H6N1 subtype AIV.This newly developed duplex Real-time RT-PCR assay was a rapid,specific and sensitive method for the detection of H6N1 subtype AIV,and it could provid a technical support to prevent and control H6N1 subtype AIV.

Key words: avian influenza virus; H6N1 subtype; duplex Real-time RT-PCR

中图分类号:

罗思思, 谢芝勋, 谢志勤, 邓显文, 刘加波, 谢丽基, 黄莉, 黄娇玲, 曾婷婷, 张艳芳, 王盛. H6N1亚型禽流感病毒二重荧光RT-PCR检测方法的建立[J]. , 2016, 43(2): 326-332.

LUO Si-si, XIE Zhi-xun, XIE Zhi-qin, DENG Xian-wen, LIU Jia-bo, XIE Li-ji, HUANG Li, HUANG Jiao-ling, ZENG Ting-ting, ZHANG Yan-fang, WANG Sheng. Establishment of a Duplex Real-time RT-PCR for Detection of H6N1 Subtype Avian Influenza Virus[J]. , 2016, 43(2): 326-332.

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H6N1亚型禽流感病毒二重荧光RT-PCR检测方法的建立

Establishment of a Duplex Real-time RT-PCR for Detection of H6N1 Subtype Avian Influenza Virus

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