牛结核分枝杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.08.009

›› 2015, Vol. 42 ›› Issue (8): 1979-1985.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.08.009

牛结核分枝杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

程振涛¹, 岳筠², 张华², 周碧君¹, 文明¹, 王开功¹, 欧德渊¹, 覃岚¹, 徐春志³

1. 贵州大学动物科学学院, 贵阳 550025;
2. 贵州省动物疫病预防控制中心, 贵阳 550008;
3. 贵阳市动物疫病预防控制中心, 贵阳 550081

收稿日期:2015-02-09 出版日期:2015-08-20 发布日期:2015-08-27
通讯作者: 程振涛 E-mail:chengzhentao@sohu.com
作者简介:程振涛(1979-),男,山东临沂人,博士,副教授,主要从事预防兽医学研究
基金资助:
贵阳市科技计划项目(筑科合同[2012]207号);贵州省农业攻关项目(黔科合NY字[2014]3042号);贵州省农业攻关项目(黔科合NY字[2011]3061号)

Development and Application of FQ-PCR Assay for Detecting Mycobacterium bovis

CHENG Zhen-tao¹, YUE Jun², ZHANG Hua², ZHOU Bi-jun¹, WEN Ming¹, WANG Kai-gong¹, OU De-yuan¹, QIN Lan¹, XU Chun-zhi³

1. College of Animal Science, Guizhou University, Guiyang 550025, China;
2. Animal Disease Prevention and Control Center of Guizhou Province, Guiyang 550008, China;
3. Animal Disease Prevention and Control Center of Guiyang, Guiyang 550081, China

Received:2015-02-09 Online:2015-08-20 Published:2015-08-27

摘要/Abstract

摘要： 为建立可应用于快速检测奶牛结核病、评估鲜乳污染状况、追溯传播途径的试验方法,本研究根据牛结核分枝杆菌基因组设计合成特异性引物,建立实时荧光定量PCR方法,并对反应条件进行优化,构建标准曲线,评价该方法的性能。结果显示,本研究所建立的实时荧光定量PCR方法能有效检测牛结核分枝杆菌目的基因,其最佳引物浓度为400 nmol/L,最佳退火温度为52 ℃。所构建的标准曲线相关性好,可用于样本的定量检测。该方法的性能评价显示,其最小检出模板浓度为80.24 ng/L,且该方法具有较好的特异性、可重复性,可对鲜乳样本进行检测。试验结果表明,本研究所建方法可用于牛结核分枝杆菌的定性和定量检测,这为奶牛结核病的诊断与净化及鲜乳食品安全评估提供重要技术。

关键词: 牛结核分枝杆菌; 实时荧光定量PCR; 建立; 应用

Abstract: To develop a detection method for rapid diagnosis of dairy cow tuberculosis, evaluation of the raw milk contamination status and tracing the route of transmission, specific primers of Mycobacterium bovis were designed to develop the FQ-PCR assay and the reaction conditions were optimized.Standard curve of the FQ-PCR test was developed and its properties were evaluated.The results showed that the developed FQ-PCR test could be used to detect the Mycobacterium bovis.The best primer concentration and annealing temperature were 400 nmol/L and 52 ℃, respectively.Properties evaluation showed that the method had good specificity, sensitivity, repeatability and clinical application.The test results indicated this method could be used to qualitatively and quantitatively detect Mycobacterium bovis.It would be an important technology for diagnosis and decontamination of dairy cow tuberculosis and safety assessment of raw milk.

Key words: Mycobacterium bovis; FQ-PCR; development; application

中图分类号:

S858.23

程振涛, 岳筠, 张华, 周碧君, 文明, 王开功, 欧德渊, 覃岚, 徐春志. 牛结核分枝杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J]. , 2015, 42(8): 1979-1985.

CHENG Zhen-tao, YUE Jun, ZHANG Hua, ZHOU Bi-jun, WEN Ming, WANG Kai-gong, OU De-yuan, QIN Lan, XU Chun-zhi. Development and Application of FQ-PCR Assay for Detecting Mycobacterium bovis[J]. , 2015, 42(8): 1979-1985.

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牛结核分枝杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

Development and Application of FQ-PCR Assay for Detecting Mycobacterium bovis

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