5种猪病多重PCR检测方法的建立

中国畜牧兽医

5种猪病多重PCR检测方法的建立

王隆柏¹，张志刚²，苏永裕²，车勇良¹，吴学敏 ¹，周伦江¹

（1.福建省农业科学院畜牧兽医研究所，福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心，福建福州 350013；2.肉食品安全生产技术国家重点实验室，福建厦门 361100）

收稿日期:2013-07-10 出版日期:2014-02-20 发布日期:2014-03-27
通讯作者: 周伦江。E-mail：lunjiang@163.com
作者简介:王隆柏（1977—），男，福建人，硕士，副研究员，研究方向：动物病毒学与分子生物学。
基金资助:
肉食品安全生产技术国家重点实验室开放项目（NP201201）；院青年基金项目（2012DQB-3）。

Establishment of the Multiplex PCR for Detection of 5 Kinds of Swine Disease

WANG Long-bai¹, ZHANG Zhi-gang², SU Yong-yu², CHE Yong-liang¹, WU Xue-min¹, ZHOU Lun-jiang¹

(1.Fujian Animal Disease Control Technology Development Center, Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine, Fujian Academy of Agricultural Sciences, Fuzhou 350013,China;2.State Key Laboratory of Food Safety Technology for Meat Products, Xiamen 361100,China)

Received:2013-07-10 Online:2014-02-20 Published:2014-03-27

摘要/Abstract

摘要： 为建立猪群常见疫病多重PCR诊断方法，本研究据GenBank发表的猪瘟病毒(classical swine fever virus，CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)、猪伪狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）、猪圆环病毒2型 (porcine circovirus type 2，PCV2)和猪细小病毒(porcine parvovirus，PPV)基因序列，设计并合成了5对特异性引物。通过反应条件优化、特异性、敏感性和重复性测定，建立了能同时扩增CSFV、PRRSV、PRV、PCV2、PPV 5种病毒的多重PCR方法。结果表明该方法只能检测出CSFV、PRRSV、PRV、PCV2、PPV 5种病毒，不能检测出猪流感病毒（swine influenza virus，SIV）、猪乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）、猪链球菌（Streptococcus suis，SS）和猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus，PEDV），能检测到CSFV、PRRSV、PRV、PCV2和PPV的核酸浓度分别为220、1.6、72、400和370 pg。初步应用结果表明，建立的多重PCR方法适用于对CSFV、PRRSV、PRV、PCV2和PPV的快速诊断。

关键词: 猪瘟病毒; 猪繁殖与呼吸综合征病毒; 猪伪狂犬病病毒; 猪圆环病毒2型; 猪细小病毒; 多重PCR; 建立

Abstract: To establish a method for simultaneous detection of classical swine fever virus (CSFV), porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV), pseudorabies virus (PRV), porcine circovirus type 2 (PCV2) and porcine parvovirus (PPV), a multiplex PCR was developed with a set of specific primers designed based on the conserved sequences of CSFV, PRRSV, PRV, PCV2 and PPV. Under the optimized conditions of multiplex PCR，five special fragments of 167 (CSFV)，433 (PRRSV)，305 (PRV), 559 (PCV2) and 882 bp (PPV) were amplified with a detection limit of 220, 1.6, 72, 400 and 370 pg, respectively. But the multiplex PCR amplification results of swine influenza virus （SIV）, Japanese encephalitis virus （JEV）, Streptococcus suis （SS） and porcine epidemic diarrhea virus （PEDV） were negative．The results showed that the multiplex PCR method was capable of CSFV, PRV, PRRSV， PCV2, PPV infection of single or mixed clinical samples for rapid diagnosis.

Key words: CSFV; PRRSV; PRV; PCV2; PPV; multiplex PCR; establishment

王隆柏，张志刚，苏永裕，车勇良，吴学敏,周伦江. 5种猪病多重PCR检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医.

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