间接ELISA检测鸭疫里默氏杆菌血清抗体方法的建立

›› 2010, Vol. 37 ›› Issue (1): 202-205.

间接ELISA检测鸭疫里默氏杆菌血清抗体方法的建立

李富祥¹，杨斌²，常志顺²，王传禹²，姚俊¹，刘艳丽²，李华春^1

(1.云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室，昆明 650224； 2.云南省畜牧兽医科学院养禽与禽病研究所，昆明 650224)

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2010-01-20 发布日期:2010-01-20
通讯作者: 李华春

Development and Application of Indirect ELISA for the Detection of Serum Antibodies against Riemerella anatipestifer in Duck

LI Fu-xiang¹, YANG Bin², CHANG Zhi-shun_^², WANG Chuan-yu², YAO Jun¹, LIU Yan-li², LI Hua-chun^1

（1.Yunnan Tropical and Subtropical Animal Virus Disease Laboratory, Kunming 650224,China; 2.Institute for Poultry Science & Health of Yunnan Animal Science and Veterinary Institute, Kunming 650224, China）

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2010-01-20 Published:2010-01-20
Contact: LI Hua-chun

摘要/Abstract

摘要： 应用1型鸭疫里默氏杆菌（云南株）超声粉碎物作为包被抗原，建立检测鸭疫里默氏杆菌血清抗体的间接ELISA方法。用倍比稀释法确定HRP标记羊抗鸭二抗最佳稀释倍数为1∶3500，并用棋盘测定法确定抗原的最佳包被浓度为2.7 mg/mL，血清最佳稀释倍数为1∶300，阴性血清临界值为0.381；阻断试验结果表明,1型鸭疫里默氏杆菌与其抗血清阻断阳性，与鸭大肠杆菌O78、O132菌株和FJ4型鸭疫里默氏杆菌阻断阴性（无交叉反应）。重复性试验结果表明，该ELISA方法批内变异系数≤0.246，批间变易系数≤0.889。结果表明，该ELISA方法特异性强，重复性好，可用于1型鸭疫里默氏杆菌（云南株）血清抗体的检测。

关键词: 鸭疫里默氏杆菌; ELISA; 血清抗体; ELISA效价

Abstract: Indirect ELISA was developed and applied for detection of serum antibodies against serotype 1(Yunnan strain)Riemerella anatipestifer (RA) in ducks, using ultrasonic RA as the coating antigen. Dilution method shew the optimum HRP-Goat Anti-Duck IgG dilution was 1∶3500, chessboard test shew the optimum coating antigen concentration was 2.7 mg/mL,the optimum dilution of serum samples was 1∶300 and the cut-off value of negative serum was 0.381.The interruption test shew the reactions between antiserum of serotype 1 RA and the coating antigen could be interrupted by specific type 1 RA, but could not be interruped by E.coli serotype O78 and serotype O132 strains(no cross-reaction).Repetition test shew the variant coefficients of the D value within assay and between assays less than 0.246 and 0.889 respectively. An interruption test and repetition test showed that the ELISA assay had good specificity and reproducibility to detect serum antibodies against serotype 1 RA in ducks.

Key words: Riemerella anatipestifer; ELISA; serum antibody; ELISA titer

中图分类号:

TQ925⁺.2

李富祥;杨斌;常志顺;王传禹;姚俊;刘艳丽;李华春. 间接ELISA检测鸭疫里默氏杆菌血清抗体方法的建立[J]. , 2010, 37(1): 202-205.

LI Fu-xiang;YANG Bin;CHANG Zhi-shun;WANG Chuan-yu;YAO Jun;LIU Yan-li;LI Hua-chun. Development and Application of Indirect ELISA for the Detection of Serum Antibodies against Riemerella anatipestifer in Duck[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2010, 37(1): 202-205.

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