塔里木马鹿鹿茸VEGF基因克隆及其在不同鹿茸组织中的表达研究

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.05.005

《中国畜牧兽医》 ›› 2017, Vol. 44 ›› Issue (5): 1289-1294.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.05.005

塔里木马鹿鹿茸VEGF基因克隆及其在不同鹿茸组织中的表达研究

刘俊峰^1,2, 王晓婷², 钟婷², 郭雪峰^1,2

1. 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室, 阿拉尔 843300;
2. 塔里木大学动物科学学院, 阿拉尔 843300

收稿日期:2016-12-22 出版日期:2017-05-20 发布日期:2017-05-18
通讯作者: 郭雪峰 E-mail:gxfdky@126.com
作者简介:刘俊峰(1980-),男,内蒙古乌兰察布人,硕士,副教授,研究方向:发育与繁殖生理学,E-mail:ljfdky@126.com
基金资助:
兵团塔里木畜牧科技重点实验室项目（HS201509）

Clone and Expression of VEGF Gene in Different Tissue of Tarim Red Deer Antler

LIU Jun-feng^1,2, WANG Xiao-ting², ZHONG Ting², GUO Xue-feng^1,2

1. Husbandry Science and Technology Key Laboratory of Production and Construction Corps Tarim in Xinjiang, Alar 843300, China;
2. College of Animal Science, Tarim University, Alar 843300, China

Received:2016-12-22 Online:2017-05-20 Published:2017-05-18

摘要/Abstract

摘要：

试验旨在从塔里木马鹿鹿茸顶端组织中克隆血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的编码序列，分析其分子特性及其在鹿茸组织中的表达情况。本研究采用改良的Trizol法提取鹿茸顶端组织总RNA，以RT-PCR方法获得VEGF基因，回收纯化后连接到pMD18-T载体，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞并鉴定，利用免疫组化法确定VEGF蛋白在塔里木马鹿鹿茸顶端组织茸皮层、间充质层和软骨层中的表达水平。结果显示，VEGF基因开放读码框（ORF）全长为648 bp，编码216个氨基酸。通过其序列比对和进化分析发现，塔里木马鹿茸中VEGF与人、牛、羊、猪的VEGF核苷酸序列同源性分别为98.75%、96.55%、97.58%和97.56%，其中与人VEGF同源性较高。免疫组化试验表明，塔里木马鹿VEGF蛋白在间充质、茸皮层和软骨中均有表达，但无明显表达差异。说明塔里木马鹿鹿茸可能会是人类研究再生医学和血管相关疾病的理想模型，同时，本研究为不同发育期塔里木马鹿鹿茸再生干细胞比较蛋白质组学研究提供了基础试验数据。

关键词: 塔里木马鹿茸; 血管内皮生长因子; 克隆; 免疫组化

Abstract:

This study was aimed to clone the coding sequence of vascular endothelial growth factor (VEGF) from the antler tissue at the top of the Tarim Red deer, and analyze the molecular properties and expression in antler tissue. This study extracted total RNA in antler tip by improved Trizol method and got the VEGF gene by RT-PCR method, then purified and connected it to pMD18-T vector, and conversed it into Escherichia coli DH5α, the expression of the VEGF protein at the top of antler tissue, between the cortex and chopped level of mesenchymal and cartilage layer in Red deer were determined using immunohistochemical method. The results showed that the open reading frame (ORF) length of VEGF gene was 648 bp, and encoding 216 amino acids, sequence homology of the nucleotide were 98.75%, 96.55%, 97.58% and 97.56% comparing with human, cattle, sheep and pig, respectively. The VEGF of Tarim Red deer antler was high similarity with that of human through its sequence analysis and comparison. The VEGF protein were expressed in the top of antler tissue, including skin mesenchymal and cartilage layer from immunohistochemical experiment, but there was no obvious difference. It was predicted that the Tarim Red deer antler might be ideal model of the blood vessel related of regenerative medicine diseases for human research.

Key words: Tarim Red deer antler; vascular endothelial growth factor; cloning; immunohistochemical

中图分类号:

Q786

刘俊峰, 王晓婷, 钟婷, 郭雪峰. 塔里木马鹿鹿茸VEGF基因克隆及其在不同鹿茸组织中的表达研究[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(5): 1289-1294.

LIU Jun-feng, WANG Xiao-ting, ZHONG Ting, GUO Xue-feng. Clone and Expression of VEGF Gene in Different Tissue of Tarim Red Deer Antler[J]. , 2017, 44(5): 1289-1294.

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