猪传染性胃肠炎病毒NSP8蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位的初步鉴定

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.02.019

›› 2015, Vol. 42 ›› Issue (2): 358-364.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.02.019

猪传染性胃肠炎病毒NSP8蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位的初步鉴定

董慧¹, 张鑫², 陈建飞², 时洪艳², 石达², 常铁城³, 谷凤丽^2,4, 徐天², 王智琴⁵, 刘明春¹, 冯力²

1. 沈阳农业大学畜牧兽医学院, 沈阳 110161;
2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所, 兽医生物技术国家重点实验室, 猪传染病研究室, 哈尔滨 150001;
3. 黑龙江八一农垦大学动物科技学院, 大庆 163319;
4. 东北农业大学生命科学学院, 哈尔滨 150030;
5. 首都医科大学基础医学院, 北京 100069

收稿日期:2014-09-12 出版日期:2015-02-20 发布日期:2015-02-13
通讯作者: 王智琴, 冯力 E-mail:wzq7626@126.com;fengli_h@163.com
作者简介:董慧(1989-),女,黑龙江哈尔滨人,硕士生,研究方向:兽医药理学与毒理学,E-mail:donghui_12215084@126.com
基金资助:
黑龙江省高等学校科技创新团队项目:猪病毒性腹泻疾病防治(2011TD001)

Preparation of Monoclonal Antibody and Preliminary Identification of Antigenic Epitope of NSP8 Protein in Porcine Transmissible Gastroenteritis Virus

DONG Hui¹, ZHANG Xin², CHEN Jian-fei², SHI Hong-yan², SHI Da², CHANG Tie-cheng³, GU Feng-li^2,4, XU Tian², WANG Zhi-qin⁵, LIU Ming-chun¹, FENG Li²

1. College of Animal Science and Veterinary Medicine, Shenyang Agricultural University, Shenyang 110161, China;
2. Division of Swine Infectious Disease, State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology, Harbin Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150001, China;
3. College of Animal Science and Technology, Heilongjiang Bayi Agricultural University, Daqing 163319, China;
4. College of Life Science, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China;
5. College of Basic Medical, Capital Medical University, Beijing 100069, China

Received:2014-09-12 Online:2015-02-20 Published:2015-02-13

摘要/Abstract

摘要： 为鉴定猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)NSP8蛋白的抗原表位,本研究对GST-NSP8重组蛋白进行了原核表达,并用纯化后的重组蛋白免疫6周龄BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾脏,采用常规杂交瘤细胞融合方法,经3次亚克隆后制备了1株稳定分泌抗NSP8蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株。分泌的单克隆抗体亚类鉴定其重链为IgG1型,轻链为κ链;杂交瘤细胞培养上清的效价为1:3 200。Western blotting试验结果表明该单克隆抗体能识别原核及真核表达的NSP8重组蛋白。利用截短表达的方法对NSP8蛋白进行抗原表位的鉴定,初步确定了单克隆抗体针对的抗原表位序列为³¹SPQILKQLTKAFNIAKSDFEREASV⁵⁵。本研究制备的单克隆抗体及对抗原表位的鉴定,为TGEV NSP8蛋白相关功能的研究奠定了基础。

关键词: 猪传染性胃肠炎病毒; NSP8基因; 单克隆抗体; 抗原表位

Abstract: To identify the epitope of porcine transmissible gastroenteritis virus (TGEV),the NSP8 gene was cloned into the vector pGEX-6P-1 for expression in E.coli.BALB/c mice of 6 week-old were immunized with the recombinant NSP8 protein.Then the monoclonal antibody against NSP8 protein was prepared by lymphocyte hybridoma technique.The monoclonal antibody belonged to IgG1 subtype with κ chain.The titers in cell culture medium of the hybidomas was 1:3 200.Western blotting assay showed that the monoclonal antibody was able to recognize the recombinant NSP8 protein.Epitope on NSP8 protein was identified by truncated expression and the linear epitope of ³¹SPQILKQLTKAFNIAKSDFEREASV⁵⁵ was identified by Western blotting with the monoclonal antibody.This monoclonal antibody and its epitope mapping provided a basis for further study of the function of the TGEV NSP8.

Key words: porcine transmissible gastroenteritis virus; NSP8 gene; monoclonal antibody; antigenic epitope

中图分类号:

S858.28

董慧, 张鑫, 陈建飞, 时洪艳, 石达, 常铁城, 谷凤丽, 徐天, 王智琴, 刘明春, 冯力. 猪传染性胃肠炎病毒NSP8蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位的初步鉴定[J]. , 2015, 42(2): 358-364.

DONG Hui, ZHANG Xin, CHEN Jian-fei, SHI Hong-yan, SHI Da, CHANG Tie-cheng, GU Feng-li, XU Tian, WANG Zhi-qin, LIU Ming-chun, FENG Li. Preparation of Monoclonal Antibody and Preliminary Identification of Antigenic Epitope of NSP8 Protein in Porcine Transmissible Gastroenteritis Virus[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2015, 42(2): 358-364.

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