抗氧氟沙星单克隆抗体的制备及ELISA快速试剂盒的初步研制

中国畜牧兽医

抗氧氟沙星单克隆抗体的制备及ELISA快速试剂盒的初步研制

董李学¹，冯才伟²，冯静²，郑百芹¹，贾芳芳²，蒙君丽¹，郝立武¹，张书宏¹

1.唐山市畜牧水产品质量监测中心，河北唐山 063000；2.北京勤邦生物技术有限公司，北京 102206

收稿日期:2014-02-07 出版日期:2014-08-20 发布日期:2014-08-22
通讯作者: 冯才伟（1978—），男，贵州人，硕士，副研究员，研究方向：食品安全检测技术。
作者简介:董李学（1984—），男，河北人，硕士，畜牧师，研究方向：畜产品质量安全检测。
基金资助:
十二五“国家科技支撑计划项目《食品质量安全控制及检测关键技术与产品》之课题”水产品加工过程质量安全控制关键技术集成与示范（2012BAD29B06）。

Preparation of Monoclonal Antibodies against Ofloxacin and Preliminary Development of its Enzyme Linked Immunosorbent Assay Kit for Rapid Detection

DONG Li-xue¹，FENG Cai-wei²，FENG Jing²，ZHENG Bai-qin¹，JIA Fang-fang²，MENG Jun-li¹，HAO Li-wu¹，ZHANG Shu-hong¹

1.Tangshan Livestock and Aquatic Products Quality Monitoring Center, Tangshan 063000, China；2.Beijing Kwinbon Biotechnology Company, Beijing 102206, China

Received:2014-02-07 Online:2014-08-20 Published:2014-08-22

摘要/Abstract

摘要： 本试验通过碳二亚胺法，将半抗原氧氟沙星与载体牛血清白蛋白（BSA）和卵清白蛋白（OVA）偶联，制备得到氧氟沙星免疫原和包被原，并制备抗氧氟沙星的单克隆抗体，初步研制测定氧氟沙星的ELISA试剂盒，经过测试，对鱼肉样本中氧氟沙星的检测限为1 μg/kg，添加回收率在62.8%～97.7%之间，批内、批间试验的相对标准偏差均小于10%。

关键词: 氧氟沙星; 单克隆抗体; ELISA试剂盒; 快速检测

Abstract: Ofloxacin was coupled with BSA as an immunogen and with OVA as a coating antigen using the coupling agent EDC. Monoclonal antibodies against ofloxacin and its enzyme linked immunosorbent assay kit were prepared and established,respectively. The limit of detection was 1 μg/kg in fish, and the recovery range was 62.8% to 97.7%. The intra and inter assay RSD were both less than 10%.

Key words: ofloxacin; monoclonal antibodies; enzyme linked immunosorbent assay kit; rapid detection

董李学，冯才伟，冯静，郑百芹，贾芳芳，蒙君丽，郝立武，张书宏. 抗氧氟沙星单克隆抗体的制备及ELISA快速试剂盒的初步研制[J]. 中国畜牧兽医.

DONG Li-xue，FENG Cai-wei，FENG Jing，ZHENG Bai-qin，JIA Fang-fang，MENG Jun-li，HAO Li-wu，ZHANG Shu-hong. Preparation of Monoclonal Antibodies against Ofloxacin and Preliminary Development of its Enzyme Linked Immunosorbent Assay Kit for Rapid Detection[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine.

参考文献

1 于海峰，张森，万忠海，等.氧氟沙星完全抗原的合成鉴定及其单克隆抗体的制备纯化［J］.食品科学，2006，27(10):223～228.
2 王永明，黄耀凌，王鹤佳，等.链霉素酶联免疫检测试剂盒的稳定性研究［J］.中国兽药杂志，2007，41(7):23～24，31.
3 孙雷，朱馨乐，刘琪，等.猪肉组织中7种氟喹诺酮类药物残留检测高效液相色谱—串联质谱法研究［J］.中国兽药杂志，2008，42(3)：12～15.
4 孙良娟，李红权，刘益锋，等.高效液相色谱—电喷雾串联质谱法测定水产品中14种喹诺酮类与磺胺类药物残留［J］.化学试剂，2012(7)：633～636.
5 刘波静.4种氟喹诺酮类药物在肉鸡组织中残留的研究［J］.中国畜牧兽医，2007，34(1):112～115.
6 杜黎明，卫洪清，张俊燕，等.反相高效液相色谱法同时测定6种氟喹诺酮类药物［J］.色谱，2003，21(5):503～506.
7 何桂华，李晓明，张爱霞，等.动物产品中4种喹诺酮药物残留同时测定的全自动固相萃取技术研究［J］.现代科学仪器，2008(3)： 23～25.
8 杨方，庞国芳，刘正才，等.液相色谱—串联质谱法检测水产品中15种喹诺酮类药物残留量［J］.分析试验室，2008，27(12)：27～33.
9 杨利国，胡少昶，魏平华，等.酶联免疫技术［M］.南京：南京大学出版社，1998.
10 郑晶，黄晓蓉，郑俊超，等.微生物抑制法与酶联免疫法检测鳗鱼中喹诺酮类药物残留的比较研究［J］.中国卫生检验杂志，2006，16（1）：79～81.
11 郑宗林，唐俊，喻文娟，等.RP-HPLC法测定中华绒螯蟹主要组织中的恩诺沙星及其代谢产物［J］.上海水产大学学报，2006，15(2)：156～162.
12 赵银丽，张改平，邓瑞广，等.恩诺沙星多克隆抗体制备及阻断ELISA检测方法的研究［J］.河南工业大学学报(自然科学版)，2008，29(5)：63～66.
13 夏昆华，周鲁，郝丽芬.喹诺酮类抗生素的研究进展［J］.国外医药抗生素分册，2004，25（3）：138～141.
14 唐伟国.医学检验诊断试剂的制备与应用［M］.上海: 上海科技文献出版社，1996.
15 曹鹏，田德金，李佩暖，等.UPLC/MS/MS测定动物组织中4种氟喹诺酮类药物残留量［J］.检验检疫科学，2008，18(4)：48～50.
16 郭春祥，郭锡琼.介绍一种简单、快速、高效的辣根过氧化物酶标记抗体的过碘酸钠法［J］.免疫学杂志，1983，33：97～100.

[1]	王小格, 司煊瑛, 闫志伟, 王飞, 尤龙琪, 刘梗, 蔡茂, 梁珺珹, 梁玉秀, 杜永坤, 张改平. 非洲猪瘟病毒p22蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(2): 781-791.
[2]	韩凤烨, 刘莹, 潘晨帆, 张乾义, 陈小云, 朱真, 印春生, 温永俊, 王凤雪, 杜吉革. 产气荚膜梭菌Alpha毒素突变体的表达及单克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(1): 442-450.
[3]	程晶, 陈沛霖, 郭禹, 崔锦蔷, 江波, 周林宜, 刘文晓, 李焕荣, 李永清. 牛早幼粒细胞白血病蛋白的原核表达及单克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(9): 4014-4024.
[4]	崔锦蔷, 程晶, 江波, 周林宜, 刘文晓, 李永清, 宋勤叶. 鸡γ-干扰素的原核表达及其单克隆抗体制备与鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(7): 3008-3019.
[5]	付明智, 李新新, 刘雪威, 李焕荣. 猪源分泌性白细胞蛋白酶抑制因子的原核表达及单克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(6): 2556-2565.
[6]	杨大为, 刘书怡, 蔺雅婷, 陈虎, 张洪亮, 李桂梅. 猪伪狂犬病病毒gB蛋白单克隆抗体的制备及竞争ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(12): 5439-5448.
[7]	曹梦瑶, 王晶, 周林宜, 程晶, 李永清, 许健, 江波, 胡格. 抗鸡早幼粒细胞白血病蛋白单克隆抗体的制备及其在荧光检测中的应用[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(10): 4500-4509.
[8]	马天天, 张亚楠, 冯亚文, 岳怀宁, 王亚文, 苏恺, 袁晨, 逯纪成, 孙泰然, 薛文阁, 宋勤叶. 非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(7): 2832-2842.
[9]	侯浩宇, 郑南南, 吴宏举, 陈寅龙, 李潮, 张昂克, 姬鹏超, 万博, 杜永坤, 张改平. 非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体制备和鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1241-1249.
[10]	陈桂娥, 容芳, 冯夏宁, 孙荣航, 马绍钊, 郝文茜, 叶子安, 刘郁夫, 李作生, 陈瑞爱. 非洲猪瘟病毒p72蛋白原核表达及单克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(11): 4646-4654.
[11]	王乐铭, 王瑜瑞, 曾子轩, 饶国顺, 吴正姣, 靳纬坤, 王冬英. 抗大片形吸虫Cat L1单克隆抗体的制备及其双抗体夹心ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(2): 677-686.
[12]	赵少若, 黄甜, 郝丽影, 吴洪超, 汪志艳, 崔宁宁, 王亚玲, 邓均华, 田克恭. 犬轮状病毒单克隆抗体制备及胶体金试纸条检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(11): 4429-4437.
[13]	莫红芳, 揭凯, 陈鑫, 文威, 刘文强, 陈焕春, 钱平, 李祥敏. 猪塞尼卡谷病毒单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 307-317.
[14]	胡换仪, 汪建中, 刘昌锦, 林敏, 刘小兰, 魏黄思梧, 邓舜洲. 绿色荧光蛋白的真核表达及其单克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 328-337.
[15]	曾建宇, 董振远, 贾文凤, 张国中, 薛佳. 新城疫病毒M蛋白单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(9): 3423-3431.