3种从猪精液中提取病毒核酸方法的比较

中国畜牧兽医

3种从猪精液中提取病毒核酸方法的比较

于晓璐¹^，2，陈茹^{1，薛春宜²，段燕瑜¹，宋长绪³，高小博^{4，曹永长²}}

(1.广东出入境检验检疫局，广东广州 510623；2.中山大学生命科学学院，广东广州 510275；3.广东省农业科学院兽医研究所，广东广州 510640；4.国家人口计生委科学技术研究所，北京 100081)

收稿日期:2013-06-26 出版日期:2014-02-20 发布日期:2014-03-27
通讯作者: 陈茹（1968—），女，海南人，博士，研究员，研究方向：动物疫病分子生物学检测研究与应用。Tel：020-38290911；E-mail: chenr@iqtc.cn
作者简介:于晓璐（1988—），女，山东人，硕士生，研究方向：动物健康养殖与疾病防治。
基金资助:
国家质量监督检验检疫总局科研项目（2013IK029）；广东省农业攻关项目（2012B020305003）。

Comparison of Three Viral Nucleic Acid Extraction Methods from Boar Semen

YU Xiao-lu¹^,2,CHEN Ru¹,XUE Chun-yi²,DUAN Yan-yu¹,SONG Chang-xu³,GAO Xiao-bo⁴,CAO Yong-chang²

(1.Guangdong Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau,Guangzhou 510623,China;2.School of Life Sciences,Sun Yat-Sen University,Guangzhou 510275,China;3.Research Institute of Veterinary Medicine,Guangdong Academy of Agricultural Sciences,Guangzhou 510640,China;4.National Research Institute for Family Planning,Beijing 100081,China)

Received:2013-06-26 Online:2014-02-20 Published:2014-03-27

摘要/Abstract

摘要： 试验分别以猪伪狂犬病病毒（PRV）和猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）作为猪DNA、RNA病毒的代表，通过添加法制备带毒精液，采用样品前处理联合试剂盒硅基质柱纯化法（简称柱纯化法）、优化TRIzol方法（简称TRIzol法）和国外文献方法（简称文献法）分别对带毒精液进行核酸提取，用实时荧光定量RT-PCR或PCR比较不同核酸提取方法的效率。结果显示，柱纯化法提取的病毒核酸的检测灵敏度达到最高，对PRRSV及PRV带毒自然精液、商品化稀释精液的检测低限分别可达1.26和0.13 TCID₅₀/mL。柱纯化法全程包括精液的前处理和核酸提取可在1 h内完成，与文献法所用时间相当，比优化TRIzol法缩短0.5 h。本试验优化了适用于从猪自然精液和商品化稀释精液中高效提取病毒核酸的方法。

关键词: 猪精液; 病毒核酸提取; 实时荧光定量RT-PCR; 实时荧光定量PCR

Abstract: Pseudorabies virus (PRV) and porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) were used as representatives of DNA and RNA viruses, respectively. Healthy semen was spiked with viruses, and then nucleic acids were extracted using following methods, semen pretreatment combined with silicon colunm kit extraction (referred to column kit method),optimized TRIzol reagent procedure and a published method. The efficiency of each method was evaluated by Real-time fluorescent RT-PCR or PCR. The results indicated that the column kit method was more sensitive and useful in viral nucleic acids extraction procedure. The limit in natural semen and commercialized semen were 1.26 and 0.13 TCID₅₀/mL by Real-time fluorescent RT-PCR or PCR detection, respectively. The column kit method including sample pretreatment took less than 1 h, which was 0.5 h shorter than TRIzol procedure. This research established and optimized the method of extracting viral nucleic acid from boar semen.

Key words: boar semen;viral nucleic acid extraction; Real-time fluorescent RT-PCR； Real-time fluorescent PCR

于晓璐，陈茹，薛春宜，段燕瑜，宋长绪，高小博，曹永长. 3种从猪精液中提取病毒核酸方法的比较[J]. 中国畜牧兽医.

YU Xiao-lu,CHEN Ru,XUE Chun-yi,DUAN Yan-yu,SONG Chang-xu,GAO Xiao-bo,CAO Yong-chang. Comparison of Three Viral Nucleic Acid Extraction Methods from Boar Semen[J]. .

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