刚地弓形虫Rop18基因的原核表达及鉴定

›› 2013, Vol. 40 ›› Issue (10): 72-75.

刚地弓形虫Rop18基因的原核表达及鉴定

曲道峰¹, 韩剑众¹, 杜爱芳²

1. 浙江工商大学食品与生物工程学院, 浙江杭州 310035;
2. 浙江大学动物科学学院, 浙江杭州 310029

收稿日期:2013-03-01 出版日期:2013-10-20 发布日期:2013-12-19
作者简介:曲道峰(1983-),男,山东人,讲师,研究方向:动物源性食品安全检测。
基金资助:
高等学校博士学科点专项科研基金(20123326120004);浙江省自然科学基金(LQ12C18001);国家自然科学基金(31201895)。

Prokaryotic Expression of Toxoplasma gondii Rop18 Gene and Immunogenicity Analysis of the Recombinant Protein

QU Dao-feng¹, HAN Jian-zhong¹, DU Ai-fang²

1. School of Food Science and Biotechnology, Zhejiang Gongshang University, Hangzhou 310035, China;
2. Institute of Preventive Veterinary Medicine, Zhejiang University, Hangzhou 310029, China

Received:2013-03-01 Online:2013-10-20 Published:2013-12-19

摘要/Abstract

摘要： 利用PCR技术从弓形虫RH株基因组中扩增出Rop18基因片段,克隆入pET-30a载体,将重组质粒转化入大肠杆菌Top10中,经酶切鉴定获得阳性重组质粒并对其进行测序。测序结果与参考序列(登录号:JX045329.1)比对发现,核苷酸同源性为99.6%。将阳性重组质粒转化入大肠杆菌BL21中,表达产物经SDS-PAGE检测结果显示,Rop18基因在大肠杆菌中成功表达;融合蛋白的分子质量在66.2 ku左右,Western blotting显示其能被兔抗弓形虫免疫血清识别。结果表明,弓形虫RH株Rop18基因可以在原核表达系统中高效表达,该重组蛋白具有免疫原性,有望作为弓形虫疫苗候选抗原。

关键词: 弓形虫; Rop18基因; 克隆; 原核表达

Abstract: In this study,the Rop18 gene of T.gondii was cloned and expressed in E.coli Top10, and the immunogenicity of the recombinant protein was analyzed. The coding region of Rop18 was amplified with PCR and cloned into the prokaryotic expression vector pET-30a. The recombinant plasmid were confirmed by PCR, enzyme digestion and DNA sequencing, which was then transformed into E.coli BL21 induced by IPTG.The expressed proteins were analyzed by SDS-PAGE and Western blotting.Results indicated that the recombinant pET30a-Rop18 was correctly constructed.The results of SDS-PAGE and Western blotting revealed that the molecular weight of the recombinant protein was approximately 66.2 ku and could be recognized by rabbit antiserum against T.gondii.The results suggested that the Rop18 gene of T.gondii could be expressed in E.coli,and immunogenicity of the recombinant protein had been identifieded by Western blotting indicating that it might be used as vaccine candidate antigen in the future.

Key words: Toxoplasma gondii; Rop18 gene; cloning; prokaryotic expression

中图分类号:

Q786

曲道峰, 韩剑众, 杜爱芳. 刚地弓形虫Rop18基因的原核表达及鉴定[J]. , 2013, 40(10): 72-75.

QU Dao-feng, HAN Jian-zhong, DU Ai-fang. Prokaryotic Expression of Toxoplasma gondii Rop18 Gene and Immunogenicity Analysis of the Recombinant Protein[J]. , 2013, 40(10): 72-75.

参考文献

1 于恩庶.弓形虫病学[M].福州:福建科学技术出版社,1992.
2 李博, 魏峰, 刘全,等. 弓形虫ROP18基因重组蜥蜴利什曼原虫的构建及鉴定[J]. 动物医学进展,2012,33(2):1~4.
3 任玉鹏,冯晓辉,余远迪,等. 副猪嗜血杆菌rfaD基因的克隆及原核表达[J]. 中国畜牧兽医, 2013, 40(6): 49~52.
4 刘苗苗, 周鹏, 朱兴全. 弓形虫棒状体蛋白的研究进展[J]. 中国兽医科学,2008,38(5):443~446.
5 Buxton D, Maley S W, Wright S E, et al. Toxoplasma gondii and ovine toxoplasmosis: New aspects of an old story[J]. Vet Parasitol,2007,149:25~28.
6 Dautu G, Munyaka B, Carmen G, et al. Toxoplasma gondii: DNA vaccination with genes encoding antigens MIC2, M2AP, AMA1 and BAG1 and evaluation of their immunogenic potential[J]. Experimental parasitology, 2007,116(3):273~282.
7 El Hajj H, Lebrun M, Arold S T, et al. ROP18 is a rhoptry kinase controlling the intracellular proliferation of Toxoplasma gondii[J]. PLoS Pathog,2007,3(2):e14.
8 Fentress S J, Behnke M S, Dunay I R, et al. Phosphorylation of immunity-related GTPases by a Toxoplasma gondii-secreted kinase promotes macrophage survival and virulence[J]. Cell Host Microbe,2010,8(6):484~495.
9 Fentress S J, Sibley L D. The secreted kinase ROP18 defends Toxoplasma's border[J]. Bioessays,2011,33(9):693~700.
10 Huang X, Li J, Zhang G, et al. Toxoplasma gondii: Protective immunity against toxoplasmosis with recombinant actin depolymerizing factor protein in BALB/c mice[J]. Exp Parasitol,2012,130:218~222.
11 Kravetz J D, Federman D G. Toxoplasmosis in pregnancy[J]. The America Journal of Medicine, 2005, 118(3): 212~216.
12 Taylor S, Barragan A, Su C, et al. A secreted serine-threonine kinase determines virulence in the eukaryotic pathogen Toxoplasma gondii[J]. Science,2006,314(5806):1776~1780.
13 Yuan Z G, Zhang X X, Lin R Q, et al. Protective effect against toxoplasmosis in mice induced by DNA immunization with gene encoding Toxoplasma gondii ROP18[J]. Vaccine,2011,29(38): 6614~6619.

[1]	焦琳琳, 成玉婷, 吴庆国, 吴双, 吴植, 朱善元, 钱莺娟. 鸭坦布苏病毒Capsid蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2395-2402.
[2]	李灿, 李楚楚, 曾维, 张宁, 纪春晓, 陈韬. 猪RegⅢγ蛋白的重组表达及功能研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2414-2426.
[3]	宋越, 苏胜杰, 张帆, 白帆, 戴伶俐, 王娜, 王大伟, 杨茜雯, 赵世华, 张月梅. 溶血性曼氏杆菌截短型白细胞毒素的原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2479-2486.
[4]	欧云文, 潘琴, 汪洋, 代军飞, 任绍科, 张洋, 张杰. 猪细小病毒6型ORF2基因的截短表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2487-2495.
[5]	刘佳隆, 张译文, 张悦然, 孙奇娟, 陈建, 何雷, 贾艳艳, 丁轲, 余祖华. 鸡ELAVL1基因克隆、原核表达及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1807-1817.
[6]	张芳源, 蔺雅婷, 杨大为, 陈虎, 李桂梅, 单虎. 非洲猪瘟病毒P30蛋白原核表达及间接ELISA检测方法建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2012-2022.
[7]	王雪平, 张孝俊, 李晓月, 王国栋, 张福良, 宋玉伟, 张明亮, 马磊. 高致病性禽腺病毒血清4型Hexon蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2053-2060.
[8]	范冰峰, 李文, 刘理想, 赵向远, 邵静, 林乐丰, 孙慧敏, 张旭林, 许保增. 水貂AANAT基因克隆及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1307-1318.
[9]	刘红润, 朱思燃, 奉玲丽, 张坤, 颜港, 王钰滨, 张帅, 江山, 许迪, 兰干球, 梁晶. 大白猪CDO1基因克隆、生物信息学分析及组织表达定位[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1352-1363.
[10]	胡乐玉, 胡欣瑶, 李颖, 赵盛淼, 沈凤臻, 王长法, 李亮亮, 王彤彤, 任慧英. 德州驴HO-1基因生物信息学分析及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1499-1510.
[11]	王文婕, 茹鹏辉, 郁川, 杜付熙, 陈松彪, 尚珂, 张春杰, 程相朝. 猫细小病毒洛阳分离株VP2蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1511-1521.
[12]	刘家兴, 韩雪英, 张鑫茹, 邓嘉昕, 姚伦广, 刘阳坤. 携带猪流行性腹泻病毒抗原表位的铁蛋白纳米颗粒制备与免疫原性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1567-1574.
[13]	贾新月, 马静, 张艳艳, 马勋, 王正荣, 薄新文. 细粒棘球绦虫EGR-07243和EGR-07244基因生物信息学分析及原核表达[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 847-858.
[14]	张永杰, 隋志远, 张志帅, 王晨光, 李孝君, 邢凤. 多浪羊NPTX1基因克隆、生物信息学分析及在初情期的表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1048-1058.
[15]	章志涛, 李祥龙, 孔令丽, 罗雨昕, 王冬英. 大片形吸虫丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A的原核表达及不同时期表达水平分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1107-1117.