进境太平洋鳕鱼寄生的异尖科线虫rDNA-ITS 序列的PCR扩增及分析

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (6): 90-92.

进境太平洋鳕鱼寄生的异尖科线虫rDNA-ITS 序列的PCR扩增及分析

李孝军, 陈宇, 唐行忠, 洪青林

舟山出入境检验检疫局,浙江舟山 316000

收稿日期:2011-12-18 出版日期:2012-06-20 发布日期:2012-07-02
作者简介:李孝军(1981－),男,浙江人,兽医师,从事进出境水产品检验检疫工作。
基金资助:
浙江省自然科学基金项目(Y3100673);浙江检验检疫科技计划资助项目(ZK200983X、ZK201128)。

PCR Amplification and Sequence Analysis of ITS rDNA of Anisakid larvae in Imported Pacific Cod

LI Xiao-jun, CHEN Yu, TANG Xing-zhong, HONG Qing-lin

Zhoushan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Zhoushan 316000,China

Received:2011-12-18 Online:2012-06-20 Published:2012-07-02

摘要/Abstract

摘要： 以日本进境的冻太平洋鳕鱼体内分离出的异尖科线虫为研究对象,采用寄生虫通用引物NC5和NC2扩增其核糖体DNA(rDNA)的内转录间隔区(ITS)序列,进行克隆、转化、测序和序列分析,并对样品进行分子鉴定。结果表明,扩增的异尖科线虫样品的ITS序列片段大小为906 bp,包含部分的18S、28S及全部的ITS1(353 bp)、5.8S(157 bp)和ITS2(299 bp)序列,ITS1和ITS2序列与GenBank登录的伪新地蛔线虫(Pseudoterranova decipiens)同源性均为在99.7%以上,与其他线虫的相似性较低。由ITS1和ITS2序列构建的系统进化树可知,从鳕鱼中分离到的线虫ITS1和ITS2均与伪新地蛔线虫处于同一分支。本研究结果为异尖科线虫种属的确定及进一步的分子生物学研究奠定基础。

关键词: 异尖科线虫; 内转录间隔区; PCR技术; 序列分析

Abstract: The aims of this study were to amplify and analyze the sequence of internal transcribed spacers (ITS) of ribosomal DNA (rDNA)of Anisakid larvae samples isolated from frozen pacific cod imported from Japan. The DNA of the samples were extracted and the ITS sequences were amplified by PCR with primers NC5 and NC2. The products were cloned into pMD18-T vector and the inserts were successfully sequenced. The results revealed ITS inserts were 906 bp in length and consisted of partial 18S,28S and complete ITS1 (353 bp),5.8S(157 bp)and ITS2(299 bp) rDNA sequences. The similarity in ITS1 and ITS2 sequences among the Anisakid larvae sample and Pseudoterranova decipiens available in GenBank were over 99.7%,and lower homology with other nematodes.The results of the present study provided a foundation for further studies of Anisakid larvae.

Key words: Anisakid larvae; internal transcribed spacers(ITS); PCR amplification; sequence analysis

中图分类号:

李孝军, 陈宇, 唐行忠, 洪青林. 进境太平洋鳕鱼寄生的异尖科线虫rDNA-ITS 序列的PCR扩增及分析[J]. , 2012, 39(6): 90-92.

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