狂犬病病毒Vero ERA株G蛋白333位点精氨酸突变株的构建

›› 2009, Vol. 36 ›› Issue (9): 79-82.

狂犬病病毒Vero ERA株G蛋白333位点精氨酸突变株的构建

郭利^1,2，王喜军³，冯娜²，葛金英³，杨松涛²，夏咸柱²，步志高³

（1.吉林农业大学研究生院，长春 130118； 2.军事医学科学院军事兽医研究所，长春 130000； 3.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部兽医公共卫生重点开放实验室暨兽医生物技术国家重点实验室，哈尔滨 150001）

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2009-09-20 发布日期:2009-09-20
通讯作者: 夏咸柱

Rescue of Vero Cell Adapted Rabies Virus ERA Vaccine Strain with R333E Mutation in Glycoprotein

GUO Li^1,2, WANG Xi-jun³, FENG Na², GE Jin-ying³, YANG Song-tao², XIA Xian-zhu²,BU Zhi-gao³

(1.Graduate School, Jilin Agriculture University, Changchun 130118, China; 2.The Institute of Veterinary Medicine, Academy of Military Medical Science, Changchun 130000, China; 3.National Key Laboratory of Veterinary Biotechnology, Harbin Veterinary Research Institute of Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150001, China)

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2009-09-20 Published:2009-09-20
Contact: XIA Xian-zhu

摘要/Abstract

摘要： 狂犬病病毒糖蛋白（G）在病毒的致病性中起着主要作用，其第333位点精氨酸（Arg）是决定病毒神经细胞侵嗜性的重要分子基础之一。为研制更加安全有效的狂犬病减毒活疫苗，本试验采用负链RNA病毒反向遗传学方法，在体外将狂犬病病毒Vero细胞适应株ERA糖蛋白G333位点精氨酸突变为谷氨酸，构建减毒株ERAGΔ，减弱了其潜在的毒力返强的危险。救获的ERAGΔ突变株在Vero细胞上表现出与ERA株亲本病毒相似的生长动力学特性。本研究成功构建并拯救出了狂犬病病毒ERA减毒疫苗株，为研制开发狂犬病病毒无毒疫苗提供了候选株。

关键词: 狂犬病病毒; 反向遗传操作; 糖蛋白G; 人工突变

Abstract: The glycoprotein (G) of rabies virus (RV) is known to play a predominant role in the pathogenesis of rabies. And G333 (Arg) is one of molecular basis that decided neurocyte tropism in rabies virus. For developing new vaccine of rabies virus which is safer and has good immunogenicity, based on reverse genetics, the antigen site R333 of Glycoprotein, in the Vero cell adapted ERA vaccine strain, was mutated from R to E. And rescued the attenuated vaccine strain ERAGΔ successfully. TCID50 was between 10-4 and 10-5, in vitro growth the virus of ERAGΔ was reproduce after 24 hours, and the highest titer was in five days, then fall-off. The result shows the same typical grows kinetics with parents ERA in Vero cells. It was a substantial technique for the next research on attenuated vaccine. In this experiment, the attenuated vaccine strain ERAGΔ was rescued successfully, and provided a good candidate for vaccine. It has great value for next research and practical application.

Key words: rabies virus; reverse genetics; glycoprotein; mutation

中图分类号:

郭利;;王喜军;冯娜;葛金英;杨松涛;夏咸柱;步志高. 狂犬病病毒Vero ERA株G蛋白333位点精氨酸突变株的构建[J]. , 2009, 36(9): 79-82.

GUO Li;;WANG Xi-jun;FENG Na;GE Jin-ying;YANG Song-tao;XIA Xian-zhu;BU Zhi-gao. Rescue of Vero Cell Adapted Rabies Virus ERA Vaccine Strain with R333E Mutation in Glycoprotein[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2009, 36(9): 79-82.

[1]	武月, 石兴亚, 张帅, 赵云环, 郭立明, 左玉柱, 范京惠. 猪伪狂犬病病毒分离鉴定及gE和gC基因遗传进化分析[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(5): 2266-2277.
[2]	焦显芹, 马晓, 田润博, 刘颖, 马世杰, 陈红英. 表达猪圆环病毒2d型Cap蛋白的重组猪伪狂犬病病毒的构建[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(5): 2278-2286.
[3]	王林青, 张刘辉, 陈曦艋, 马世杰, 宋月, 陈红英. 猪瘟病毒E2基因部分表位区重组猪伪狂犬病病毒的构建及生物学特性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(4): 1815-1824.
[4]	梁东阁, 姚晨, 柴雅静, 蔡梦攀, 褚贝贝, 鲁维飞, 王江, 曾磊, 刘忠虎, 明胜利. 猪源Rab基因shRNA文库与稳定细胞株的构建及其对猪伪狂犬病病毒增殖的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(3): 1250-1258.
[5]	杨大为, 刘书怡, 蔺雅婷, 陈虎, 张洪亮, 李桂梅. 猪伪狂犬病病毒gB蛋白单克隆抗体的制备及竞争ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(12): 5439-5448.
[6]	王林青, 赵丽, 陈曦艋, 吴少峰, 韩莹莹, 刘芳, 金钺, 陈红英. 河南省猪伪狂犬病病毒野毒感染血清学调查及gE基因遗传变异分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(8): 3364-3372.
[7]	张婧旭, 徐玉, 梁海英, 曾智勇, 汤德元, 王彬, 徐松平, 万娟, 祝羊. 伪狂犬病病毒贵州分离株与疫苗株遗传进化和抗原表位分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1093-1106.
[8]	杨苏珍, 刘运超, 邢云瑞, 孙亚宁, 尚延丽, 张改平. 基于量子点技术的猪伪狂犬病病毒gB抗体免疫层析试纸研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(10): 4160-4167.
[9]	谢思豪, 勾红潮, 卞志标, 李斌, 蔡汝健, 臧莹安, 李春玲. MLKL基因敲除对猪伪狂犬病病毒复制的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(5): 1934-1941.
[10]	赵静, 褚颖, 罗均, 郭霄峰. 嵌合犬瘟热病毒H基因的重组狂犬病病毒的构建及免疫原性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(12): 4776-4785.
[11]	邢嘉友, 樊文杰, 王昱旻, 鲁秀香, 宋月, 褚贝贝, 王江, 王梦迪. 他莫昔芬对猪伪狂犬病病毒体外增殖的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(11): 4503-4512.
[12]	杨明珠, 陈晓春, 宋佳诚, 侯亚欣, 李俊平. 重组动物疱疹病毒活载体疫苗的构建与应用研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 338-351.
[13]	曲哲会, 张喜文, 赵瑜, 郑全芳, 连慧香, 赵云焕, 郭晓秋. 豫南地区猪伪狂犬病病毒流行株的主要毒力基因遗传变异分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(8): 3019-3029.
[14]	黄二素, 咸文, 张爱琼, 王彬, 曾智勇, 汤德元, 梁海英, 何小莉, 徐玉, 徐松平, 祝羊. 猪伪狂犬病病毒GZYY2015变异株的分离鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(5): 1832-1840.
[15]	任春芝, 路彩霞, 韦英益, 于美玲, 胡庭俊. 辣蓼黄酮乙酸乙酯部分对PRV体外诱导RAW264.7细胞分泌炎性因子的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(3): 1132-1140.