牛分枝杆菌融合基因ESAT6-MPB63-HSP65的原核表达及鉴定

›› 2009, Vol. 36 ›› Issue (9): 55-59.

牛分枝杆菌融合基因ESAT6-MPB63-HSP65的原核表达及鉴定

郝辉¹，侯绍华¹，丁家波²，毛开荣²，朱鸿飞¹

(1.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京 100193； 2.中国兽医药品监察所，北京 100081)

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2009-09-20 发布日期:2009-09-20
通讯作者: 朱鸿飞

Prokaryotic Expression and Identification of Fused ESAT6-MPB63-HSP65 Gene of Mycobacterium bovis

HAO Hui¹， HOU Shao-hua¹， DING Jia-bo²， MAO Kai-rong²， ZHU Hong-fei¹

(1.Institute of Animal Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences， Beijing 100193, China； 2.China Institute of Veterinary Drug Control， Beijing 100081， China)

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2009-09-20 Published:2009-09-20
Contact: ZHU Hong-fei

摘要/Abstract

摘要： 以牛分枝杆菌Vallee Ⅲ株基因组DNA为模板，PCR扩增ESAT6、MPB63和HSP65基因，将其依次定向克隆入原核表达载体pET-32a (+)，构建重组质粒pET-E6-M63-H65，将重组质粒转化到大肠杆菌BL21 (DE3) 感受态细胞，1 mmol/L IPTG诱导融合蛋白表达，以Ni2+亲和层析柱纯化表达的融合蛋白并进行Western blotting 分析。结果表明，rESAT6-MPB63-HSP65融合蛋白为可溶性表达，且大小与理论值相符，纯化的融合蛋白能够与抗牛分枝杆菌阳性血清发生反应，为进一步的诊断学研究奠定了基础。

关键词: 牛分枝杆菌; 融合基因; 原核表达; 蛋白纯化

Abstract: The genomic DNA of Mycobacterium bovis Vallee Ⅲ strain was used as template and the genes of ESAT6, MPB63 and HSP65 were amplified by PCR. Then these genes were tandemly inserted into pET-32a(+) to construct recombinant pET-E6-M63-H65. After the transfromation into Escherichia coli BL21 (DE3) competent cells，the fused protein was expressed effectively with 1 mmol/L IPTG induction and purified by Ni2+ purification system for Western blotting analysis. The results showed that the fused proteins were correctly in molecular weight and present in soluble status. Meanwhile, the purified protein can interact with the positive sera to M.bovis, which support important materials for the molecular diagnosis for M.bovis in the future.

Key words: Mycobacterium bovis; fused gene; prokaryotic expression; protein purification

中图分类号:

S852.61⁺8

郝辉;侯绍华;丁家波;毛开荣;朱鸿飞. 牛分枝杆菌融合基因ESAT6-MPB63-HSP65的原核表达及鉴定[J]. , 2009, 36(9): 55-59.

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