【目的】以羊口疮病毒129（ORFV129）蛋白为研究对象，在构建山羊鼻甲骨原代细胞cDNA文库的基础上，通过酵母双杂交筛选与其相互作用的蛋白。【方法】采用Smart^TM技术构建山羊鼻甲骨原代细胞cDNA文库。构建诱饵质粒pGBKT7-129，并将其转化至Y2HGold酵母感受态细胞，验证质粒pGBKT7-129是否具有自激活性。对转化了质粒pGBKT7-129的菌液进行生长曲线测定，验证该质粒是否对酵母细胞有毒性作用。以ORFV129为诱饵蛋白，利用酵母双杂交系统筛选出与ORFV129相互作用的宿主胞内蛋白并对阳性菌落进行PCR和测序鉴定。利用DAVID 6.7的GO数据库对胞内宿主蛋白进行功能分类和通路分析，并依据Cytoscape v 3.8.0软件绘制ORFV129与胞内蛋白相互作用的网络图。以山羊脾脏为组织样本，采用RT-PCR技术克隆山羊补体C1q结合蛋白（complement C1q binding protein，C1QBP）基因CDS区序列，并采用在线软件进行生物信息学分析。将C1QBP基因CDS区序列连接至pcDNA3.1（+）构建真核表达载体pcDNA3.1（+）-C1QBP，并将其转染至山羊鼻甲骨原代细胞进行亚细胞定位分析。【结果】试验成功构建山羊鼻甲骨原代细胞cDNA文库，文库容量约为6.0×10⁶ CFU/mL。成功构建诱饵质粒pGBKT7-129，重组质粒pGBKT7-129无自激活能力且对酵母细胞无毒性。利用酵母双杂交筛选出14个与ORFV129进行互作的胞内蛋白并对阳性克隆进行PCR、测序验证。试验成功克隆山羊C1QBP基因CDS区，长度为837 bp，编码279个氨基酸。系统进化树显示，山羊和绵羊亲缘关系最近。C1QBP蛋白为不稳定的亲水性蛋白，无信号肽结构和跨膜结构域，主要包括3种磷酸化位点，分别是18个丝氨酸、4个苏氨酸和3个酪氨酸位点。C1QBP蛋白二级结构由α-螺旋（33.81%）、无规则卷曲（46.40%）、延伸链（16.91%）和β-转角（2.88%）组成，三级结构与二级结构一致。间接免疫荧光试验表明，C1QBP蛋白散在分布于细胞质中。【结论】筛选出了与ORFV129蛋白相互作用且在天然免疫应答中发挥作用的宿主胞内蛋白C1QBP，通过间接免疫荧光试验验证C1QBP定位于细胞质中，推测ORFV129与能C1QBP相互作用诱导炎症，为进一步验证ORFV129蛋白介导ORFV抑制机体免疫应答的过程奠定基础。

【目的】试验旨在对鸡Wnt基因家族进行全面系统地调查分析，并进一步明确鸡感染新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）后Wnt基因家族成员的表达模式。【方法】基于鸡基因组测序结果，通过查询Pfam和UniPort数据库获取鸡Wnt基因家族全基因组序列，构建系统进化树，分析Wnt蛋白理化性质、亚细胞蛋白定位、染色体分布、保守结构域等，并进一步研究鸡感染NDV后Wnt基因家族成员的表达模式。【结果】试验共鉴定到39个鸡Wnt基因家族成员。系统进化树分析发现，鸡与人和鼠的Wnt成员相似性较高，均有12个亚家族，即Wnt1、Wnt2（Wnt2a和Wnt2b）、Wnt3a、Wnt4、Wnt5（Wnt5a和Wnt5b）、Wnt6、Wnt7（Wnt7a和Wnt7b）、Wnt8（Wnt8a和Wnt8b）、Wnt9（Wnt9a和Wnt9b）、Wnt10a、Wnt11及Wnt16成员，但鸡缺少Wnt10b。鸡Wnt成员分布于11条染色体上，分别为Chr1、Chr2、Chr4、Chr6、Chr7、Chr12、Chr13、Chr21、Chr26、Chr27和Chr34，成员间出现14次串联重复，且无节段重复出现。39个鸡Wnt成员中共识别出10个保守基序，其3'-端较为保守，除rna-XM_040653060.2（Wnt6）和rna-XM_040650634.2（Wnt5a）外，其余成员3'-端均由基序2和5组成；39个鸡Wnt家族成员均含保守区域，即基序1和3。转录组数据分析结果表明，鸡在感染NDV过程中Wnt7a表达量显著上调。【结论】鸡Wnt基因家族成员在染色体上呈现非均匀分布，其基因结构较为保守，且串联重复是Wnt基因家族成员的主要扩增方式。Wnt7a可能与Wnt调节巨噬细胞参与微生物感染过程密切相关。

【目的】构建布鲁氏菌BPE159基因缺失株，研究缺失株体外生长变化特征及其在宿主细胞中的存活能力，探究布鲁氏菌感染期间分泌蛋白BPE159对自噬因子表达的影响。【方法】同源重组方法构建布鲁氏菌BPE159基因重组质粒，电转化布鲁氏菌S2308感受态细胞构建BPE159基因缺失株S2308ΔBPE159。PCR扩增BPE159基因，连接转化构建pBBR1MCS-4-BPE159载体，提取质粒进行电转化，构建BPE159基因回补株S2308ΔBPE159-C。琼脂糖凝胶电泳检测缺失株和回补株遗传稳定性。构建布鲁氏菌感染小鼠巨噬细胞RAW264.7模型，实时荧光定量PCR检测布鲁氏菌侵染后自噬细胞因子ATG5、Beclin1、LC3a和LC3b基因表达水平。以S2308、S2308ΔBPE159和S2308ΔBPE159-C株侵染小鼠巨噬细胞，收集细胞总RNA，实时荧光定量PCR检测BPE159基因缺失对布鲁氏菌侵染后自噬细胞因子表达水平的影响。在相同起始浓度下培养S2308、S2308ΔBPE159及S2308ΔBPE159-C株，观察细菌生长变化趋势；评价S2308ΔBPE159株在不同时间点的生存繁殖能力。【结果】成功构建BPE159基因缺失株S2308ΔBPE159和回补株S2308ΔBPE159-C，并可稳定遗传10代。实时荧光定量PCR结果显示，经布鲁氏菌侵染24 h后，与PBS组相比，S2308组中自噬因子ATG5基因表达水平显著降低（P<0.05），Beclin1、LC3a和LC3b基因表达水平极显著降低（P<0.01）；与S2308组相比，S2308ΔBPE159组自噬因子Beclin1、LC3a基因表达水平显著升高（P<0.05），ATG5、LC3b基因表达水平极显著升高（P<0.01）。生长曲线结果显示，在相同培养条件下，S2308ΔBPE159和S2308ΔBPE159-C株与S2308株具有相似的生长变化趋势。胞内生存试验结果显示，侵染8 h后，S2308ΔBPE159株在细胞中的数量极显著低于亲本株S2308（P<0.01），12和24 h存活能力显著低于S2308株（P<0.05）。【结论】本研究成功构建并获得了具有良好遗传稳定性的布鲁氏菌BPE159基因缺失株和回补株，S2308ΔBPE159株与S2308株生长趋势相似，但生存繁殖能力明显下降；BPE159基因缺失后布鲁氏菌可促进细胞自噬因子的表达，本研究结果为研究布鲁氏菌分泌蛋白的生物学功能和调控机制奠定了基础。

【目的】试验旨在对犊牛肝脏蛋白进行蛋白质组学分析，筛选与初乳、常乳摄入相关的蛋白。【方法】以经产荷斯坦母牛分娩的9头公犊牛为研究对象，随机分为初乳组（CI）、常乳组（M）和对照组（CT），每组3头。初乳组和常乳组犊牛分别饲喂初乳和常乳，于出生后24 h屠宰；对照组未饲喂初乳或常乳，于出生后2 h屠宰。采用Label-free蛋白组学技术对3组犊牛肝脏的蛋白表达谱进行分析，以Q<0.05为阈值筛选各组间的差异表达蛋白，并进行GO功能和KEGG通路富集分析。【结果】在犊牛肝脏中共鉴定到3 901个蛋白，其中在初乳组、常乳组和对照组中分别鉴定到3 521、3 646和3 548个蛋白，有3 202个蛋白在3组中共表达。对差异表达蛋白进行分析显示，初乳组和常乳组犊牛肝脏中共筛选出287个差异表达蛋白，主要参与细胞代谢、应激反应、生长发育和氧化还原等生物过程，显著富集通路为内吞作用、氨基酸代谢和氧化磷酸化；初乳组和对照组犊牛肝脏中共筛选出154个差异表达蛋白，主要参与细胞代谢、单组织过程和肌酸合成等生物过程，显著富集通路为氨基酸代谢、黏着斑和内吞作用等。【结论】饲喂初乳的犊牛肝脏中差异表达蛋白主要参与分解代谢、氧化还原等生物过程，为犊牛摄入初乳后肝脏的蛋白响应机制提供了新的见解。

【目的】试验旨在建立永生化蒙古马胎儿成纤维细胞（equine fetal fibroblasts，EFFs）系，为马繁殖与发育生物学研究提供参考。【方法】采用1 mg/mL胶原酶Ⅳ消化分离原代EFFs，利用表达人端粒酶逆转录亚基（hTERT）和潮霉素B抗性的pLV-hTERT-IRES-hygro慢病毒感染EFFs，经潮霉素B筛选得到阳性细胞hTERT-EFFs，以第3代EFFs为对照，采用实时荧光定量PCR检测hTERT mRNA的表达水平，CCK-8法绘制生长曲线检测细胞增殖能力，流式细胞仪检测细胞凋亡情况，β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况。使用DNAMAN软件比对分析人、马、小鼠、牛、绵羊、猪多物种TERT核苷酸、蛋白和端粒酶RNA组分（TERC）序列相似性。【结果】原代EFFs在实验室培养体系下可传至17代，但第17代细胞发生了衰老。hTERT基因可成功转入EFFs，并至少稳定表达20代。然而hTERT-EFFs增殖能力显著低于EFFs （P<0.05），hTERT-EFFs凋亡早期细胞率显著高于EFFs （P<0.05）。细胞衰老检测结果表明，hTERT-EFFs β-半乳糖苷酶染色呈阳性。序列相似性比对结果显示，马TERT与hTERT mRNA保守性较高，相似性为73.2%；马TERT与hTERT蛋白保守性较其他物种高，相似性为76.3%，表明马TERT与hTERT在结构和功能上是高度相似；马TERC与人TERC相似性较高，在进化树上位于同一分支，但马TERC与TERT的结合及与端粒酶活性相关的关键核苷酸中存在突变。【结论】单独过表达hTERT可以延长EFFs体外传代次数不超过30代，但仍不足以使蒙古马EFFs细胞高质量永生化，这可能与hTERT与eTERC不相容有关。

【目的】探索miR-142-3p对奶山羊化学诱导乳腺上皮细胞（chemical induced mammary epithelial cells，CiMECs）体外泌乳功能的调节作用，旨在为促进转基因乳腺生物反应器的发展以及"培养皿奶"的商业化生产奠定基础和提供新的思路。【方法】选取奶山羊耳缘成纤维细胞（GEFs）为研究材料，经单一小分子化合物TGFβR-1/ALK5的抑制剂（RepSox）诱导8 d后，分别从细胞的形态变化、特异性标记物免疫荧光染色以及油红O染色对其进行鉴定。之后运用脂质体转染技术在诱导成功的奶山羊CiMECs中分别转染miR-142-3p的抑制物（miR-142-3p inhibitor）及抑制物对照（inhibitor-NC），不转染的细胞作为空白对照（BC），转染24 h后，采用实时荧光定量PCR检测miR-142-3p的表达水平，CCK-8法检测细胞的增殖率，Western blotting检测β-酪蛋白（β-casein）的表达量，甘油三酯酶法测定甘油三酯的含量。【结果】GEFs诱导8 d后形成岛屿状多核仁样的上皮样聚集；免疫荧光染色结果显示，诱导后的GEFs表达乳腺上皮细胞（MECs）的特异性标记物细胞角蛋白14（CK14）和CK18；油红O染色结果显示，诱导后的GEFs细胞质内弥散分布着大小不等被染上红色的脂滴，表明成功获得了具有泌乳功能的奶山羊CiMECs。奶山羊CiMECs转染试验结果显示，与空白对照组相比，miR-142-3p inhibitor组miR-142-3p的相对表达量显著降低（P<0.05），inhibitor-NC组miR-142-3p表达量无显著差异（P>0.05）；miR-142-3p inhibitor组奶山羊CiMECs的增殖率、β-casein表达量及甘油三酯分泌量均显著增加（P<0.05），inhibitor-NC组奶山羊CiMECs的增殖率、β-casein表达量及甘油三酯分泌量均无显著差异（P>0.05）。【结论】GEFs经RepSox诱导8 d可成功转变为具有泌乳功能的奶山羊CiMECs，抑制miR-142-3p可显著促进奶山羊CiMECs的增殖并增加β-casein表达量及甘油三酯的分泌量，从而影响泌乳功能。

猪多潜能干细胞是在体外建立起来的具有自我更新及三胚层分化潜能的一类干细胞，可应用于发育生物学研究、基因组编辑和疾病模型建立等各方面，在畜牧业生产及再生医学研究中具有重要的应用价值。培养体系对多潜能干细胞的成功构建具有重要意义，其包含多种成分，包括基础培养液、氨基酸等营养成分、小分子化合物（信号通路激活剂/抑制剂及细胞因子）共同维持细胞的多能性并抑制其分化。目前已有诸多关于猪多潜能干细胞的报道，但尚未获得高效的培养体系可以维持猪多潜能干细胞的长期传代并完成生殖嵌合。猪多潜能干细胞可分为原始态（Naïve）、形成态（Formative）及始发态（Primed）3种不同多能性的状态特点，根据建系来源的不同分为猪扩展多潜能干细胞、猪胚胎干细胞、猪前原肠胚上胚层干细胞、猪诱导多能干细胞4种干细胞类型。作者综述了猪多潜能干细胞培养体系中常用的细胞因子和信号通路激活剂/抑制剂对猪多潜能干细胞的多能性和分化能力的影响和作用，为进一步建立具有真正生殖嵌合能力的Naïve多能性的猪多潜能干细胞系提供研究思路。

【目的】探究黄芪多糖（Astragalus polysaccharide，APS）对雏鸡肠道形态和局部黏膜免疫的影响，阐明APS减轻肠炎雏鸡肠黏膜损伤的作用机制。【方法】在构建LPS诱导肠炎模型试验中，选取15只14日龄SPF雏鸡随机分为3组：对照组（Con）、低剂量脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）模型组（D_L）和高剂量脂多糖模型组（D_H），每组5只。对照组灌喂生理盐水，D_L和D_H组分别灌喂1和2 mg/kg BW LPS，连续处理3 d，取小肠组织，采用HE染色法观察小肠病理变化，采用实时荧光定量PCR检测白介素-1β（interleukin 1β，IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor α，TNF-α） mRNA表达量，筛选构建肠炎模型的最佳LPS剂量。在APS对肠黏膜损伤的保护试验中，将20只7日龄雏鸡分为4组：对照组（C）、脂多糖炎症组（L）、黄芪多糖组（A）和黄芪多糖抑制炎症组（A+L），每组5只。A和A+L组从7日龄到试验结束每天自由饮用APS溶液（1.0 g/L），C组在此期间自由饮水；L和A+L组雏鸡14日龄时灌喂筛选所得剂量的LPS，连续3 d。取各组雏鸡胸腺、脾脏、法氏囊和小肠组织，计算雏鸡免疫器官指数；采用HE染色法观察雏鸡小肠黏膜形态，糖原PAS染色法检测杯状细胞数量，实时荧光定量PCR检测咬合蛋白-1（Occludin-1）、闭合蛋白-1（Claudin-1）和闭合小环蛋白-1（ZO-1） mRNA表达量。【结果】在构建LPS诱导肠炎模型试验中，D_L、D_H组雏鸡小肠组织均出现肠黏膜固有层充血、肠绒毛损伤等现象，且IL-1β和TNF-α mRNA表达量显著高于对照组（P<0.05），因此确定雏鸡灌喂1 mg/kg BW LPS建立肠炎模型。在APS对肠黏膜损伤的保护试验中，与对照组相比，L组雏鸡小肠绒毛破碎，固有层充血，免疫器官指数显著下降（P<0.05），小肠隐窝深度显著升高（P<0.05），绒腺比（V/C）显著下降（P<0.05），杯状细胞数量显著减少（P<0.05），紧密连接蛋白Occludin-1、Claudin-1和ZO-1的mRNA表达量均显著下降（P<0.05）；与L组相比，A+L组雏鸡免疫器官指数显著增加（P<0.05），肠黏膜损伤程度减轻，肠绒毛高度和绒腺比等指标显著升高（P<0.05），隐窝深度显著降低（P<0.05），杯状细胞数量显著增多（P<0.05），空肠和回肠紧密连接蛋白mRNA表达量均显著升高（P<0.05）；A组雏鸡杯状细胞数量相比于其他组明显增多，空肠和回肠紧密连接蛋白表达量也显著升高（P<0.05）。【结论】雏鸡灌喂1 mg/kg BW LPS可成功建立肠炎模型，1.0 g/L APS可优化肠道组织形态，促进雏鸡局部黏膜免疫系统的发育，可以保护肠炎雏鸡小肠组织及肠黏膜免受损伤，最终达到预防雏鸡细菌性肠炎的效果。

【目的】本试验旨在研究以低水平复合有机微量元素（铁、铜、锰、锌和硒）来取代实际生产中较高水平无机形式微量元素对肉鸭血清生化指标、免疫指标和肝脏抗氧化能力的影响，以期为肉鸭饲养中的有机微量元素减量使用提供一定的科学依据。【方法】将450只1日龄的樱桃谷肉鸭（公母各半）随机分成5组，每组6个重复，每个重复15只。空白对照组（NC组）于基础饲粮中不额外添加微量元素，ITM组于基础饲粮中添加NRC （1994）推荐量的无机元素（铁、铜、锰、锌和硒添加量分别为40、10、50、60、0.2 mg/kg），1/2 ITM组和1/2 OTM组分别于基础饲粮中添加50% NRC推荐量无机微量元素和50% NRC推荐量有机微量元素，1/2（ITM＋OTM）组于基础饲粮中添加50% NRC推荐量无机微量元素＋50% NRC推荐量有机微量元素。试验期42天。于试验第21和42天，每个重复随机选取1只肉鸭，采集血液和肝脏，用于测定血清生化相关指标、血清中的总蛋白及免疫球蛋白水平和肝脏中的抗氧化指标。【结果】①与NC组相比，ITM组肉鸭21和42 d时血清中碱性磷酸酶（ALP）活性显著提高（P<0.05），42 d时肉鸭血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）活性和尿酸（UA）含量均显著降低（P<0.05）。与ITM组相比，1/2 ITM组21 d肉鸭血清中ALP活性显著降低（P<0.05），1/2（ITM＋OTM）和1/2 OTM组21和42 d肉鸭血清中ALP、ALT、AST、LDH活性及葡萄糖（GLU）、总胆固醇（T-CHO）、甘油三酯（TG）、UA含量均无显著差异（P>0.05）。②与NC组相比，ITM组肉鸭21和42 d时血清中球蛋白（GLOB）、总蛋白（TP）、免疫球蛋白A （IgA）和免疫球蛋白M （IgM）水平以及21 d时免疫球蛋白G （IgG）水平均显著提高（P<0.05）。与ITM组相比，1/2 ITM组21 d肉鸭血清TP、GLOB和IgG水平以及42 d时的TP、GLOB、IgA和IgM水平均显著降低（P<0.05），1/2 OTM组21 d肉鸭血清中IgG水平显著降低（P<0.05），同时，1/2（ITM＋OTM）组和1/2 OTM组肉鸭21和42 d时肉鸭血清中白蛋白（ALB）、GLOB、TP、IgA和IgM水平均无显著差异（P>0.05）。③与NC组相比，ITM组肉鸭21和42 d时肝脏中的总抗氧化能力（T-AOC）以及过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、铜锌超氧化物歧化酶（Cu/Zn-SOD）和锰超氧化物歧化酶（Mn-SOD）活性均显著提高（P<0.05），丙二醛（MDA）含量显著降低（P<0.05）。与ITM组相比，1/2 ITM组21和42 d时肝脏MDA含量显著提高（P<0.05），T-AOC以及CAT、GSH-Px、T-SOD和Cu/Zn-SOD活性均显著降低（P<0.05）；1/2 OTM组部分抗氧化物酶活性虽有所降低，但T-AOC及MDA含量并未发生显著性变化（P>0.05）。【结论】综上所述，仅饲喂50% NRC推荐剂量的复合有机微量元素即可达到传统商业剂量的无机微量元素提高免疫和抗氧化能力的效果，建议在肉鸭饲粮中以50% NRC推荐剂量的复合有机微量元素来取代传统商业剂量的无机微量元素。

【目的】探究准噶尔双峰驼哺乳期幼驼和成年母驼粪便菌群结构组成及多样性变化，为幼驼肠道健康发育提供重要依据。【方法】选取6~7岁体况相近的健康成年母驼12峰，以及出生日期相近（3月龄）的哺乳期母幼驼12峰，母驼与幼驼在相同饲养环境下饲养。采用直肠取粪法采集粪样，用于粪便内容物细菌16S rDNA的V3-V4区测序，并对测序数据进行相应分析。【结果】母驼粪便菌群Chao1和Shannon指数均显著高于幼驼（P<0.05）；在门水平上，母驼和幼驼粪便中位于前十的菌均为厚壁菌门、拟杆菌门、疣微菌门、变形菌门、软壁菌门、螺旋体门、TM7、放线菌门、蓝藻菌门和纤维杆菌门，其中幼驼粪便中变形菌门和软壁菌门丰度均极显著高于母驼（P<0.01）；在科水平上，母驼与幼驼粪便中位于前十的菌均为瘤胃球菌科、消化链球菌科、毛螺菌科、梭菌科、克里斯滕森菌科、理研菌科、疣微菌科、拟杆菌科、艰难杆菌科和普雷沃氏菌科，其中母驼粪便中消化链球菌科和梭菌科的丰度均极显著高于幼驼（P<0.01），而幼驼粪便中毛螺菌科的丰度极显著高于母驼（P<0.01）；在属水平上，母驼与幼驼粪便中位于前十的菌属均为梭菌属、颤螺旋菌属、瘤胃球菌属、梭菌科-梭菌属、阿克曼菌属、5-7 N15、CF231、苏黎世杆菌属、梭菌科-SMB53和密螺旋体菌属，其中母驼粪便中的梭菌属、梭菌科-梭菌属和苏黎世杆菌属的丰度均极显著高于幼驼（P<0.01）。【结论】成年母驼粪便菌群多样性显著高于哺乳期幼驼，且稳定性较好；母驼和幼驼的粪便在门、科、属水平下的主导菌属种类均一致，但是丰度均存在差异。

【目的】试验旨在研究全株小黑麦干草对育成牛营养物质表观消化率、血清生化指标及瘤胃发酵的影响，为小黑麦干草在畜牧业中的合理使用提供数据参考。【方法】在相同的饲养条件下，选取10月龄、平均体重为（325.0±20.0） kg、健康、生理状态良好的荷斯坦育成牛30头，随机分为3组：对照组、Ⅰ、Ⅱ组，每组10头牛，每头为一个重复。对照组饲喂基础饲粮（苜蓿干草：小麦秸秆＝1：1），Ⅰ、Ⅱ组分别以全株小黑麦干草替代饲粮中50％（苜蓿干草：小麦秸秆：全株小黑麦干草＝0.5：0.5：1）和100％干草（100%全株小黑麦干草），试验预饲期7 d，正试期66天。于正试期前后对每头牛称重，并每天记录采食量，计算平均日增重和料重比；正试期最后4 d采集粪便和饲粮样品，测定各营养物质表观消化率；正试期第66天晨饲前采集血液，晨饲后2 h采集瘤胃液，测定血清生化和瘤胃发酵指标。【结果】①各组育成牛体重、日增重均差异不显著（P>0.05）；Ⅱ组料重比显著高于对照组（P<0.05）。②Ⅰ组育成牛干物质（DM）、有机物（OM）和粗蛋白质（CP）表观消化率与对照组相比差异不显著（P>0.05），但极显著高于Ⅱ组（P<0.01）；Ⅰ组牛中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）表观消化率显著高于Ⅱ组（P<0.05），且极显著高于对照组（P<0.01）。③育成牛血清中葡萄糖（GLU）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、总蛋白（TP）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量在各组间均无显著差异（P>0.05）；Ⅱ组牛血清白蛋白（ALB）浓度极显著高于对照组和Ⅰ组（P<0.01）；Ⅰ组牛血清尿素氮（UN）含量显著低于对照组（P<0.05），但与Ⅱ组差异不显著（P>0.05）。④育成牛瘤胃pH、总挥发性脂肪酸（TVFA）、乙酸、丙酸、丁酸含量及乙酸/丙酸（A/P）在各组间均无显著差异（P>0.05）；Ⅱ组牛瘤胃NH₃-N浓度显著高于Ⅰ组（P<0.05），与对照组间无显著差异（P>0.05）；Ⅱ组牛瘤胃微生物蛋白（MCP）含量显著低于Ⅰ组（P<0.05）。【结论】将育成牛粗饲料中50％的干草替换为全株小黑麦干草，对其血清生化指标及瘤胃发酵均具有一定的改善作用，且显著提高了饲粮中营养物质表观消化率。

【目的】本试验旨在探讨发酵豆粕（FSBM）对断奶仔猪生长性能、消化酶活性及肠道菌群结构的影响。【方法】试验选取48头21日龄断奶仔猪（杜×长×大，6.88 kg±0.13 kg），随机分为对照组和试验组，每组4个重复，每个重复6头猪。对照组饲粮为基础饲粮，试验饲粮用6% FSBM等量替代基础饲粮中的豆粕。试验期为20 d。试验期间记录采食量和体重。试验第21天，每个重复选取2头猪屠宰，收集回肠食糜测定消化酶活性和肠道菌群结构，并对两者进行相关性分析。【结果】①饲喂FSBM可显著提高断奶仔猪的终末体重和平均日增重（average daily gain，ADG），并显著降低了料重比（feed/gain，F/G）（P<0.05）；②FSBM组断奶仔猪回肠中的胰蛋白酶和淀粉酶活性显著提高（P<0.05）；③饲喂FSBM显著提高了断奶仔猪回肠食糜中拟杆菌门、普雷沃氏菌科NK3B31类群、厌氧弧菌属、瘤胃菌科UCG-005、普氏菌属2、巨型球菌属、副杆菌属、Solobacterium及毛螺菌科UCG-004的相对丰度，显著降低了链球菌属的相对丰度（P<0.05）；④相关性分析显示，胰蛋白酶活性与颤螺菌属、瘤胃菌科UCG-005的相对丰度呈显著正相关（P<0.05），而与Subdoligranulum、萨特氏菌属的相对丰度呈显著负相关（P<0.05）；淀粉酶活性与普雷沃氏菌科UCG003、柔嫩梭菌属的相对丰度呈显著正相关（P<0.05），而与琥珀酸弧菌属、罗姆布茨菌属的相对丰度呈显著负相关（P<0.05）；脂肪酶活性与柠檬酸杆菌属的相对丰度呈显著负相关（P<0.05）。【结论】饲喂FSBM可改变断奶仔猪回肠菌群结构，增加断奶仔猪回肠胰蛋白酶和淀粉酶活性，并提高其生长性能。

【目的】试验旨在研究补喂L-精氨酸对返情纯血马妊娠率及血液参数的影响。【方法】选择返情纯血母马14匹随机分为2组，每组7匹（n=7），分别为对照组、L-精氨酸组，对照组饲喂基础饲粮，L-精氨酸组在基础饲粮中添加50 g/d L-精氨酸；预饲期7 d，试验期30 d。返情母马发情时，第一次人工输精结束当天补喂L-精氨酸；配种结束时直肠B超检查妊娠情况，统计妊娠率，分别于试验第0、15、30天颈静脉采血，用于测定总一氧化氮合成酶（total nitric oxide synthetase，TNOS）、内皮型一氧化氮合成酶（endothelial nitric oxide synthetase，eNOS）活性及一氧化氮（nitric oxide，NO）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、生长激素（growth hormone，GH）、胰岛素样生长因子（insulinlike growth factor，IGF）含量等指标。【结果】与对照组相比，L-精氨酸组妊娠率显著提高（P<0.05）；试验第0、15、30天血浆TNOS、eNOS、鸟氨酸脱羧酶（orinithine decarboxylase，ODC）活性及NO、IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ、VEGF含量在两组间均无显著差异（P>0.05）；试验第30天L-精氨酸组血浆氨（ammonia，NH₃）、尿素氮（urea nitrogen，UN）含量分别比对照组降低13.49%、26.91%（P<0.05）。与对照组相比，试验第30天L-精氨酸组血浆GH含量提高50.26%（P<0.01），试验第0、15、30天两组间母马血浆免疫球蛋白A （IgA）、免疫球蛋白M （IgM）、免疫球蛋白G （IgG）含量均无显著差异（P>0.05）。【结论】返情纯血母马补喂L-精氨酸能显著提高妊娠率，改变母马体循环血浆UN、NH₃、GH含量。L-精氨酸可作为营养调控剂提高纯血母马妊娠率。

【目的】通过研究饲粮苏氨酸水平对22~42日龄黄羽肉鸡生长性能、胴体品质和免疫功能的影响，确定其苏氨酸需要量。【方法】试验选用22日龄快大型岭南黄羽肉鸡1 600只，根据体重相同的原则分为5个组，每组8个重复，每个重复40只肉鸡（公母各半）。采用玉米-花生粕型基础饲粮，5个处理组试验鸡分别饲喂含0.60%（基础饲粮）、0.67%、0.74%、0.81%和0.88%苏氨酸饲粮，试验期为21 d。试验结束后，每个重复选取2只鸡屠宰采样，测定屠宰性能、免疫器官指数和血清生化指标。【结果】饲粮苏氨酸水平显著影响黄羽肉公鸡、母鸡的体重、平均日增重和料重比（P<0.05）。对于母鸡，0.88%苏氨酸水平组平均日增重最高；0.81%苏氨酸水平组平均日采食量最高。对于公鸡，0.81%苏氨酸水平组平均日增重最高；0.81%苏氨酸水平组平均日采食量最高。饲粮苏氨酸水平与黄羽肉公鸡平均日增重、平均日采食量以及公、母鸡料重比呈显著的二次线性相关（P<0.05）；根据平均日增重和平均日采食量回归方程得出黄羽肉公鸡饲粮苏氨酸最适水平分别为0.81%和0.83%；根据料重比回归方程得出黄羽肉母鸡和公鸡饲粮苏氨酸最适水平分别为0.83%和0.86%。饲粮苏氨酸水平对黄羽肉公鸡、母鸡的全净膛率、半净膛率、腿肌率、胸肌率均无显著影响（P>0.05）；对黄羽肉公鸡全净膛率和腹脂率均有显著影响，其中0.81%苏氨酸组全净膛率显著高于0.60%和0.74%苏氨酸组，0.88%苏氨酸组腹脂率显著低于0.60%和0.67%苏氨酸组（P<0.05）。饲粮苏氨酸水平显著影响黄羽肉母鸡法氏囊指数和胸腺指数，其中0.60%苏氨酸组法氏囊指数显著低于0.81%苏氨酸组，0.81%和0.88%苏氨酸组胸腺指数显著高于0.60%苏氨酸组（P<0.05）；对肝脏指数、脾脏指数无显著影响（P>0.05）。饲粮苏氨酸水平对黄羽肉母鸡血清中甘油三酯、胰岛素含量有显著影响，其中0.60%苏氨酸水平组血清中胰岛素含量最低，0.88%苏氨酸水平组血清中甘油三酯含量最低，显著低于0.60%苏氨酸组（P<0.05）；苏氨酸水平对黄羽肉公鸡甘油三酯含量有显著影响，其中0.88%苏氨酸水平组血清中甘油三酯含量最低，显著低于0.60%和0.67%苏氨酸组（P<0.05）。【结论】饲粮中添加适量苏氨酸可以提高黄羽肉鸡生长性能、胴体品质，促进免疫器官发育。以生长性能为主要判定指标，确定22~42日龄黄羽肉母鸡饲粮最适苏氨酸水平为0.83%，黄羽肉公鸡最适苏氨酸水平为0.81%。

【目的】通过比较饲喂苜蓿鲜草和全价颗粒饲料对兔胃黏膜抗氧化能力和胃肌层结构的影响，为兔健康饲养和提高养殖户的收益提供依据。【方法】选用20只健康、体重相近的断奶新西兰兔，随机分为饲料组和苜蓿草组，每组10只，分别饲喂苜蓿鲜草和全价颗粒饲料，饲养30 d。通过空气栓塞法将新西兰兔处死后解剖，称量胃的长度和重量，利用生物化学法测定胃黏膜的抗氧化能力，包括总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性和脂质过氧化物（LPO）、丙二醛（MDA）含量，胃pH以及胃蛋白酶的活性，同时运用组织切片技术、苏木精伊红染色及图像分析法测定胃的贲门部、胃底部、胃体部以及幽门部的肌层厚度。【结果】饲料组体重和胃液pH均显著高于苜蓿草组（P<0.05），而苜蓿草组胃相对重量、胃蛋白酶浓度以及胃黏膜抗氧化能力均显著或极显著高于饲料组（P<0.05；P<0.01）。苜蓿草组兔胃贲门部、胃底部以及幽门部的总肌层厚度均极显著大于饲料组（P<0.01），在贲门部苜蓿草组的纵行肌厚度显著大于饲料组（P<0.05），环行肌厚度极显著大于饲料组（P<0.01），在胃底部苜蓿草组斜行肌厚度显著大于饲料组（P<0.05），而其余部位的肌层厚度均无显著差异（P>0.05）。【结论】不同饲喂条件下，苜蓿草组胃化学消化能力、抗氧化能力以及胃肌层厚度均显著高于饲料组。

【目的】研究灌胃和腹腔注射鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus，LGG）对妊娠期小鼠粪便菌群多样性的影响，为动物妊娠期生理及肠道健康提供理论依据。【方法】选择体重相近（23.33 g±1.55 g）、配种日期相同的SPF级妊娠昆明小鼠45只，随机分为3组，分别为对照组、试验Ⅰ组和试验Ⅱ组，每组15只。在相同饲养管理和饲粮营养水平下，从妊娠的第2天开始，对照组饲喂基础饲粮；试验Ⅰ组腹腔注射0.5 mL含有0.125 g LGG的灭菌生理盐水（连续14 d）；试验Ⅱ组灌胃0.5 mL含有0.125 g LGG的灭菌生理盐水（连续18 d），试验期21 d。所有小鼠于临产前1 d解剖，采集大肠粪便样品，提取各组粪便样本的基因组DNA，PCR扩增后进行文库构建，对合格文库应用NovaSeq 6000测序平台进行测序，采用Uparse软件（v 7.0.1001）以97%的一致性将序列聚类成为操作分类单元（OTUs）并筛选代表序列。采用Mothur方法与SILVA 132的SSUrRNA数据库进行物种注释分析，并统计门、科和属水平上的群落组成。使用QIQME 1.7.0软件进行Alpha多样性分析，计算Chao1、ACE、Shannon、Simpson指数，并进行LEfSe分析，利用FAPROTAX预测肠道菌群的功能。【结果】与对照组相比，试验Ⅱ组Chao1和ACE指数显著升高（P<0.05），试验Ⅰ和Ⅱ组小鼠Simpson指数降低（P>0.05）。与对照组相比，在门水平上，试验Ⅰ和Ⅱ组厚壁菌门升高；试验Ⅰ组变形菌门升高，试验Ⅱ组变形菌门降低；在科水平上，试验Ⅰ和Ⅱ组的毛螺菌科、乳酸菌科、韦荣球菌科和脱硫弧菌科升高；在属水平上，试验Ⅰ和Ⅱ组的乳酸杆菌属和未确定毛螺菌科属均升高。LEfSe分析结果显示，对照组有2种显著性的菌；FAPROTAX预测出35种肠道菌群的功能。【结论】在本试验条件下，灌胃LGG能够显著提高Chao1和ACE指数，且灌胃LGG组OTUs数量高于腹腔注射组；灌胃组小鼠厚壁菌门/拟杆菌门的比值、变形菌门、脱硫弧菌科和乳酸杆菌属较腹腔注射组降低，未确定毛螺菌科属升高。综合比较两种补喂方式，给妊娠小鼠灌胃LGG对妊娠期健康有促进作用。

【目的】试验旨在分析山羊Z-DNA结合蛋白（Z-DNA binding protein 1，ZBP1）基因3'-端非翻译区（3'-UTR）、内含子1和外显子7区域中单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）位点与产羔性能之间的关联性，为高繁殖力山羊分子育种提供新的遗传标记。【方法】选取麻城黑山羊、黑头羊和波尔山羊作为研究样本，采集血样提取DNA，根据转录组数据所选SNP位点在山羊ZBP1基因序列中的位置信息设计引物，利用多重单碱基延伸SNP分型技术（SNaPshot）分析所选SNP位点的遗传多样性，采用一般线性模型（GLM）对ZBP1基因SNP位点与3个品种山羊的产羔性能进行关联分析。【结果】山羊ZBP1基因中存在12个潜在的SNPs位点，其中7个SNPs位点（g.9734 A>G、g.9772 T>C、g.352 C>T、g.955 C>T、g.1880 G>A、g.2566 T>C和g.7919 G>A）具有多态性，除g.9734 A>G在麻城黑山羊群体中仅有AA和GA 2种基因型外，其余6个SNPs位点在麻城黑山羊、波尔山羊和黑头羊群体中均表现为CC （AA）、CT （GA）和TT （GG）3种基因型。波尔山羊群体中g.9734 A>G、g.9772 T>C位点表现为低度多态（PIC<0.25）；麻城黑山羊群体中g.9734 G>A和g.7919 G>A位点表现为低度多态（PIC<0.25），g.9772 T>C、g.352 C>T、g.955 C>T、g.1880 G>A和g.2566 T>C位点表现为中度多态（0.25<PIC<0.5）；黑头羊群体中g.9734 A>G、g.352 C>T和g.7919 G>A位点表现为低度多态（PIC<0.25）。卡方适应性检测结果表明，g.9734 A>G、g.9772 T>C和g.352 C>T位点在3个山羊群体中均处于Hardy-Weinberg平衡状态（P>0.05），波尔山羊及麻城黑山羊群体中g.2566 T>C位点处于Hardy-Weinberg平衡状态（P>0.05）。关联分析结果显示，g.9772 T>C位点与波尔山羊头胎产羔数显著关联（P<0.05），g.352 C>T和g.7919 G>A位点与波尔山羊总体产羔数均显著或极显著关联（P<0.05；P<0.01）；g.352 C>T位点与黑头羊总体产羔数极显著关联（P<0.01）；g.9772 T>C位点与麻城黑山羊头胎产羔数显著关联，g.9734 A>G和g.9772 T>C位点与麻城黑山羊总体产羔数均显著关联（P<0.05）。连锁不平衡分析结果表明，波尔山羊群体中g.352 C>T、g.2566 T>C、g.7919 G>A和g.9734 A>T位点之间处于强连锁平衡状态（D’>0.85，r²=1）；黑头羊群体中g.352 C>T和g.2566 T>C位点之间及g.2566 T>C、g.9734 A>T和g.9772 T>C位点之间处于强连锁平衡状态（D’>0.83，r²=1）；麻城黑山羊群体中g.352 C>T和g.9772 T>C位点之间处于强连锁平衡状态（D’>0.87，r²=1）。【结论】本研究筛选出7个SNPs，在山羊群体中共存在5个完全连锁的SNPs，其中g.352 C>T、g.7919 G>A、g.9772 T>C和g.9734 A>G 4个SNPs位点可分别作为特定山羊品种育种过程中产羔性能的潜在候选遗传标记，为山羊产羔性能研究提供参考数据。

【目的】探究猪精子体外获能前后顶体酶抑制剂（AI）表达量以及AI的泛素化水平的变化，了解AI与泛素-蛋白酶体系统（UPS）间的联系，为深入研究泛素-蛋白酶体途径（UPP）在猪精子获能过程中的作用提供参考。【方法】选择18~24月龄的成年健康长白公猪，使用手握法采集公猪精液，将一部分精子进行获能处理，一部分作为对照（鲜精），使用计算机辅助精子分析系统（CASA）、低渗肿胀法（HOST）、考马斯亮蓝染色、Western blotting和锌离子（Zn²⁺）标记检测获能前后精子的动力学参数、质量参数、酪氨酸磷酸化水平和Zn²⁺含量；Western blotting检测获能前后精子中AI和泛素（Ub）的表达量；免疫荧光法检测AI和Ub在精子中的定位；免疫共沉淀分析AI和Ub的结合情况。【结果】与新鲜精子相比，获能精子动力学参数VSL和BCF极显著升高（P<0.01），获能精子的活力、质膜完整性、顶体膜完整性、活率均极显著降低（P<0.01）；获能精子蛋白酪氨酸磷酸化水平极显著升高（P<0.01），Zn²⁺极显著外流（P<0.01）。Western blotting检测结果表明，与新鲜精子相比，获能精子AI表达量极显著降低（P<0.01），Ub表达量显著升高（P<0.05）；免疫荧光结果表明，AI和Ub均定位于精子头部顶体区域；免疫共沉淀分析结果显示，获能精子AI发生了泛素化，在抑制泛素激活酶（E1）后，泛素化的AI极显著减少（P<0.01）。【结论】在猪精子体外获能期间，精子蛋白酪氨酸磷酸化水平极显著提高、泛素化水平增强，且AI被降解，从而释放有活性的顶体酶，为后续精子穿透透明带（ZP）与卵母细胞结合完成受精做准备。

【目的】本研究基于试验测定的中国荷斯坦牛血液和乳汁中的孕酮浓度表型，探究了影响中国荷斯坦牛体内孕酮分泌的环境因素、孕酮浓度的变化趋势、孕酮浓度与乳成分的关联程度以及血乳中孕酮浓度的预测方法。【方法】试验于2021年8月在北京、山东两个牧场采集不同胎次、泌乳阶段和妊娠状态的中国荷斯坦泌乳牛的奶样、尾根血样，测定孕酮浓度，最终获得402条乳汁孕酮浓度和298条血液孕酮浓度表型用于数据分析。对孕酮浓度进行数据转化使其近似服从正态分布后，采用固定效应模型探究胎次、泌乳阶段、妊娠状态、牧场等固定效应对奶牛孕酮表型的影响，运用R语言cor函数计算孕酮与各乳成分间的关联，并利用偏最小二乘法和个体及乳成分信息对孕酮浓度进行预测，以建立孕酮浓度表型高通量获取手段。【结果】妊娠状态对转化乳汁孕酮浓度存在极显著影响（P<0.01），胎次、场效应对转化乳汁孕酮浓度均有显著影响（P<0.05），而转化血液孕酮浓度只受到妊娠状态影响（P<0.01）；全乳固体、乳脂率、乳蛋白率、脂蛋比与转化乳血孕酮浓度均存在显著或极显著的正相关关系（r=0.14~0.37，P<0.05；P<0.01）；基于本试验数据，乳成分与个体信息对转化乳血孕酮浓度的预测准确性不高（R²=0.030~0.17），但如果增加血液或乳汁的转化孕酮浓度对乳汁或血液的转化孕酮浓度进行预测，预测效果则有大幅提升（R²=0.40）。【结论】影响泌乳期中国荷斯坦牛转化孕酮浓度的因素除妊娠状态外，可能还包括饲养条件与胎次。此外转化孕酮浓度与乳脂率、乳蛋白率等乳成分呈极显著相关。基于乳成分信息与转化孕酮的关系，获得了对中国荷斯坦牛乳血转化孕酮浓度预测的可用策略，为今后牧场的繁殖辅助管理、奶牛育种新性状研发以及孕酮浓度的高通量获取等提供了新思路。

【目的】探究黔北麻羊黑素皮质素受体-4（melanocortin receptor-4，MC4R）基因多态性及其与生长性状的关联性，为黔北麻羊的选种选育提供理论依据。【方法】选取196只6月龄黔北麻羊，利用DNA混合池结合Sanger测序筛选MC4R基因单核苷酸多态性（SNP）位点，并采用SPSS 22.0软件中的一般线性模型（GLM）对MC4R基因SNP位点与黔北麻羊生长性状进行关联分析。【结果】在黔北麻羊MC4R基因中发现4个SNPs位点：g.59345469 C>A和g.59346773 T>C位点分别位于5'-和3'-端非编码区（UTR）；g.59345871 A>C位点突变导致第37位天冬氨酸（Asp）变为丙氨酸（Ala），引起RNA二级结构及蛋白质二级结构、三级结构发生明显改变；g.59346263 A>G位点突变导致第168位异亮氨酸（Ile）变为缬氨酸（Val），对RNA二级结构和蛋白质二级结构有明显影响。关联分析结果显示，g.59345469 C>A位点对黔北麻羊体重、胸围和管围均有显著影响（P<0.05）；g.59345871 A>C位点对黔北麻羊体重、体高、管围和胸围均有显著影响（P<0.05）；g.59346263 A>G位点对黔北麻羊体高、体重和胸围均有显著影响（P<0.05）；g.59346773 T>C位点对黔北麻羊体重和胸围均有显著影响（P<0.05）。4个SNPs位点联合共检测到9种单倍型和21种双倍型，其联合对黔北麻羊体重、体高、胸围和管围均产生显著遗传效应（P<0.05），纯合双倍型H5H5（AAAAGGCC）个体的生长性状优于其他双倍型。【结论】黔北麻羊MC4R基因存在4个SNPs位点，与黔北麻羊体重和胸围均存在显著关联，可作为黔北麻羊体重和胸围的遗传标记用于分子育种。

【目的】评估泛素激活酶（E1）对猪精子获能、膜重构和体外受精的影响。【方法】选取5头长白猪采集精液，以硫醇酯法评估泛素激活酶（ubiquitin activating enzyme，E1）抑制剂（TAK-243）对精子中泛素（ubiquitin，Ub）与E1结合的影响；将精子分为鲜精组（Fresh）、DMSO组（DMSO）、获能组（Capacitated）及2.4、4.8和7.2 nmol/L TAK-243组，鲜精组用2 mL PBS重悬精子沉淀；获能组用2 mL获能液重悬精子沉淀；DMSO组及2.4、4.8和7.2 nmol/L TAK-243组分别用2 mL含0.07% DMSO及2.4、4.8和7.2 nmol/L TAK-243的获能液重悬精子沉淀，使用微生物动（静）态图像检测系统检测精子的动力学参数；以Western blotting法检测精子的酪氨酸磷酸化水平；Zn²⁺荧光探针检测精子的Zn²⁺含量；花生凝集素染色检测精子的顶体膜重构；免疫荧光法检测顶体表面精子黏附蛋白（AQN-1、AWN）的表达；体外受精法检测TAK-243对精卵结合和卵裂率的影响。【结果】硫醇酯分析结果表明，TAK-243处理组精子未形成Ub-E1复合物，说明TAK-243抑制了E1对Ub的激活作用。与鲜精组相比，获能组精子的曲线速度（VCL）和平均鞭打频率显著升高（P<0.05）。3个浓度TAK-243组与获能组精子的各项动力学参数差异均不显著（P>0.05）。与获能组相比，3个浓度TAK-243组酪氨酸磷酸化水平均显著降低（P<0.05），且随着TAK-243浓度的增加，精子蛋白的酪氨酸磷酸化水平逐渐降低。后续试验使用7.2 nmol/L TAK-243进行精子中Zn²⁺水平和顶体膜重构的研究，其结果表明，与获能组相比，7.2 nmol/L TAK-243组Zn²⁺水平、顶体膜完整性及AQN-1和AWN蛋白的表达水平均显著增加（P<0.05），精子与卵母细胞的黏附率和卵裂率均显著降低（P<0.05）。【结论】7.2 nmol/L TAK-243显著降低了精子获能期间蛋白酪氨酸磷酸化水平、精卵结合率和卵裂率，显著增加了Zn²⁺含量、顶体膜完整率及顶体表面蛋白AWN和AQN-1的表达，说明泛素-蛋白酶体信号通路参与了精子的体外获能。

【目的】研究采精员、猪舍温湿度、氨气浓度和光照强度对种公猪精液品质的影响，以提高猪精液品质。【方法】选取347头（580±48） d的杜洛克公猪，收集2021年11月至2022年2月共2 966条精液测定记录，采精员做好每天公猪的采精记录，猪舍温湿度、氨气浓度和光照强度参数于每天上午09：00进行测定。使用R软件对采精员记录、环境参数和精液性状进行关联分析。【结果】①采精员对精液品质具有显著影响（P<0.05），8号采精员采集的精液精子活力最高、精子畸形率最低。②猪舍环境温度为22~25 ℃时，精子活力显著高于18.5~22 ℃（P<0.05），精子畸形率显著低于18.5~22 ℃（P<0.05）。③相对湿度在70%~77%时精子活力最高、精子畸形率最低，与相对湿度在46%~60%时差异显著（P<0.05），与相对湿度在60%~70%时无显著差异（P>0.05），相对湿度在60%~70%时精子活力、精子畸形率和总精子数都处于较高水平。④随着氨气浓度降低，精子活力和总精子数呈现上升趋势、精子畸形率呈下降趋势，氨气浓度2~4 ppm与5~7.3 ppm时精子活力、总精子数、精子畸形率差异显著（P<0.05）。⑤光照强度在90~110 lx时精子活力和直线前进运动精子比例最高，与光照强度为130~164.5 lx差异显著（P<0.05），光照强度对精子畸形率无显著影响（P>0.05）。【结论】猪舍环境参数温度范围为22~25 ℃、湿度范围为60%~70%、氨气浓度2~4 ppm和光照强度为90~110 lx时公猪的精液品质较高。生产中还应加强对采精员的管理培训，减少精液采集过程中造成的机械损伤及细菌污染，为今后研究、修订种公猪舒适环境参数，科学调控猪舍内环境提供参考和理论依据。

【目的】探究中国荷斯坦奶牛牛嘴宽度的群体规律，并估计其遗传参数。【方法】2021年7月至2021年8月分别在2个规模化奶牛场测定了628头泌乳期荷斯坦奶牛的牛嘴宽度及臀高、体高、体斜长和胸围等体尺性状，同时利用体斜长和胸围估计试验牛体重。利用SPSS 26.0软件分析了牧场、月龄和泌乳阶段等因素对牛嘴宽度的影响，以及牛嘴宽度与各体尺性状之间的相关关系；基于DMU软件采用单性状动物模型估计了牛嘴宽度的方差组分及遗传力。【结果】荷斯坦奶牛牛嘴宽度的群体平均值为17.28 cm，变异系数为5%，变异相对较小；牧场和月龄对牛嘴宽度均有极显著影响（P<0.01），泌乳阶段对牛嘴宽度有显著影响（P<0.05），牛嘴宽度随母牛月龄的增加呈逐渐增加的趋势，泌乳初期牛嘴宽度显著小于其他泌乳阶段（P<0.05）；牛嘴宽度与各体尺性状之间存在极显著正相关（P<0.01）；荷斯坦奶牛牛嘴宽度的遗传力估计值为0.28，为中高遗传力性状。【结论】牧场和月龄对奶牛牛嘴宽度影响极显著，泌乳阶段对奶牛牛嘴宽度影响显著，牛嘴宽度与臀高呈较弱相关。荷斯坦奶牛牛嘴宽度是一个具有中高遗传力的体尺性状。

【目的】本研究旨在探索东佛里生羊、湖羊及东湖杂交羊的泌乳性能。【方法】选取同一养殖场健康东佛里生羊（DF）、湖羊（H）、东湖杂交一代（F1）、级杂二代（F2）各197、313、346、364只。收集其在2020—2021年间的日泌乳量数据，使用六次多项式拟合泌乳曲线，估计泌乳曲线参数；采集奶样，用乳品分析仪测定乳脂、乳蛋白、乳糖、总固形物和尿素氮；对奶绵羊乳房拍照进行形态学描述，测量乳头形态数据，包括乳头长度、乳头间距和乳头直径；麻醉后采集空怀期乳腺组织，制作组织切片，苏木精-伊红（HE）染色后镜检。【结果】东佛里生羊泌乳量显著高于杂交一代（P<0.05），东佛里生羊与级杂二代泌乳量差异不显著（P>0.05），杂交一代与级杂二代泌乳量均显著高于湖羊（P<0.05）。使用六次多项式模型拟合不同杂交代奶绵羊泌乳曲线，拟合度均高于0.90。东佛里生羊、湖羊、杂交一代、级杂二代泌乳高峰日分别为58、18、45与47 d，泌乳高峰日泌乳量分别为2.31、1.27、2.24和1.97 kg。湖羊乳脂含量显著高于其他杂交代奶绵羊（P<0.05），东佛里生羊与杂交一代乳蛋白含量差异显著（P<0.05），湖羊与级杂二代乳蛋白含量差异显著（P<0.05），各杂交代奶绵羊其他乳成分不存在显著差异（P>0.05）。测量结果表明，湖羊乳头长度显著小于其他杂交代奶绵羊（P<0.05），级杂二代乳头间距显著高于其他杂交代奶绵羊（P<0.05）。研究未发现乳头大小与泌乳量存在关系。湖羊乳沟浅，乳头朝向与地面平行；东佛里生羊乳沟深，乳头朝向与地面垂直方向夹角<45°；杂交一代与级杂二代的乳房形态结构相似，乳头朝向呈外"八"字形，适合机器挤奶。东佛里生羊、杂交一代与级杂二代乳腺组织发达，乳腺结构中腺泡导管数量均比湖羊密集。【结论】湖羊与东佛里生羊杂交后，级杂二代泌乳量显著提高，乳房形态与乳腺结构结果表明级杂二代有良好的泌乳基础。

【目的】探究呼吸型传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus，IBV）对蛋鸡免疫反应的影响及重组禽β-防御素（avian β-defensins，AvBDs）的抗病毒作用。【方法】试验将70只7日龄SPF白来航鸡随机分为2组，每组35只。攻毒组通过滴鼻点眼途径接种呼吸型IBV强毒（CK/CH/LSD/05I），对照组以相同途径接种等剂量灭菌PBS。定时观察临床症状14 d并记录，在攻毒后12 h、36 h、3 d、7 d和14 d 2组各随机选取5只鸡心脏采血处死，检测血清抗体水平并收集部分气管和肾脏进行组织病理学检测。采集法氏囊、脾脏、肾脏和气管，提取RNA，运用实时荧光定量PCR方法检测组织中IBV的病毒载量、Toll样受体（Toll-like receptors，TLRs）及信号转导分子、AvBDs基因表达量变化。将重组AvBD11和AvBD12转染鸡胚肾细胞（chicken embryo kidney，CEK）并在病毒感染细胞后6、12、24、36和48 h收取细胞上清和细胞用于提取RNA，通过实时荧光定量PCR方法检测病毒载量。【结果】感染呼吸型IBV强毒后，鸡出现轻微呼吸道症状，剖检无明显病理变化。在感染14 d后，鸡血清抗体水平转阳且阳性率为100%。实时荧光定量PCR结果显示，对照组均未检测到病毒，攻毒组仅在感染14 d后的气管中检测到病毒且病毒载量低。与对照组相比，攻毒组脾脏中TLR1、TLR5、AvBD9和AvBD12基因表达量在感染后7 d均显著升高（P<0.05），攻毒组法氏囊中TLR1、TLR2、TLR3、AvBD5和AvBD9基因表达量及气管中核转录因子-κB p65（NF-κB p65）、NF-κB c-Rel、AvBD5、AvBD9、AvBD11和AvBD13基因表达量在感染14 d后均显著升高（P<0.05）。体外抗病毒结果显示，与转染空载体组相比，转染AvBD11的CEK细胞在感染24和48 h后病毒载量显著下调（P<0.05），细胞上清的病毒载量在感染48 h后显著下调（P<0.05）；转染AvBD12的CEK细胞在感染12和24 h后病毒载量显著下调（P<0.05），细胞上清的病毒载量在感染12和48 h后显著下调（P<0.05），说明重组AvBD11和AvBD12在CEK细胞中具有抗IBV活性。【结论】呼吸型IBV强毒感染机体后增强了相关受体的基因表达和信号转导，上调了AvBDs基因表达，加强了机体免疫反应。重组AvBD11和AvBD12具有抗病毒作用，为无抗饲料的配制及研究提供了新思路。

【目的】构建猪轮状病毒（Porcine rotavirus，PoRV）流行株PoRV G9P[23]型的VP4基因重组腺病毒，为开发PoRV候选基因工程疫苗奠定基础。【方法】参考GenBank中流行株PoRV G9P[23]型的VP4基因序列（登录号：MH898990.1）合成PoRV VP4基因，将得到的目的基因与腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV进行重组，转化大肠杆菌Top10感受态细胞，构建腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-VP4；腺病毒穿梭载体经过Pme Ⅰ内切酶线性化处理后与含有腺病毒骨架pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞进行同源重组获得重组质粒pAd-VP4，对重组质粒进行Pac Ⅰ酶切鉴定，并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞。将重组质粒转染HEK293A细胞获得重组腺病毒rAd-VP4，对该重组腺病毒进行扩大培养并测定重组腺病毒的半数组织培养感染剂量（TCID₅₀）；通过RT-PCR检测其体外表达情况，Western blotting检测其反应原性；将制备的重组腺病毒用不同病毒滴度和不同免疫次数对小鼠进行腹腔免疫，收集血清通过ELISA法测定IgG抗体水平。【结果】RT-PCR扩增出1条大小为2 343 bp的rAd-VP4重组腺病毒条带，测序结果正确，表明重组腺病毒rAd-VP4构建成功，测得rAd-VP4病毒滴度为10^6.5 TCID₅₀，Western blotting结果表明，重组腺病毒rAd-VP4在蛋白水平上得到了正确表达，蛋白的分子质量约为87 ku。小鼠IgG抗体检测结果表明，在用10^6.5 TCID₅₀ rAd-VP4免疫后的第35和42天，小鼠血清中的IgG抗体水平显著高于10^5.3 TCID₅₀ TGE-PED-PRV三联活疫苗IgG抗体水平（P<0.05）；10^6.5 TCID₅₀ rAd-VP4在免疫后第35和42天产生的抗体水平显著高于10^5.5和10^4.5 TCID₅₀ rAd-VP4（P<0.05），而10^5.5 TCID₅₀ rAd-VP4在免疫后第28天产生的抗体水平显著高于10^6.5和10^4.5 TCID₅₀ rAd-VP4（P<0.05）。10^6.5 TCID₅₀ rAd-VP4的2次免疫和3次免疫产生的IgG抗体在不同免疫时间均差异不显著（P>0.05）。【结论】本研究成功构建了重组腺病毒rAd-VP4，其病毒滴度为10^6.5 TCID₅₀。10^6.5和10^5.5 TCID₅₀ rAd-VP4分别在第42和28天产生较高的IgG抗体水平，2次免疫和3次免疫对产生IgG抗体水平均无显著影响。试验结果可为开发PoRV重组腺病毒候选疫苗提供参考。

【目的】试验旨在表达与纯化非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）的结构蛋白p22，将其作为包被抗原建立ASFV抗体的间接ELISA检测方法，用于诊断非洲猪瘟。【方法】将ASFV p22编码基因KP177R的截短体（24―145位氨基酸）克隆至原核表达载体pET-32a （+）中，将重组质粒pET-32a-p22转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，经0.1 mmol/L IPTG诱导表达5 h，利用镍柱亲和纯化p22蛋白，并进行Western blotting鉴定。利用p22蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗血清，并以含p22全长基因的真核表达质粒pCAGGS-EGFP-fp22转染HEK293T细胞为抗原基质，利用间接免疫荧光（IFA）鉴定抗血清的反应性。以重组p22蛋白为包被抗原，优化最佳抗原包被浓度、待检血清稀释度、封闭条件、抗原抗体反应时间、酶标二抗工作浓度等参数，建立ASFV抗体间接ELISA检测方法，并对临床猪血清样品进行检测。【结果】ASFV p22截短蛋白在大肠杆菌中高水平表达，蛋白产量为0.85 mg/100 g菌体；p22蛋白具有良好的免疫原性，小鼠血清抗体效价为1：12 800。本研究建立的ELISA方法（p22-ELISA）的最佳抗原包被浓度为0.125 μg/孔，最佳待检血清稀释度为1：800，最佳酶标二抗稀释度为1：10 000；阴阳性临界值为0.384；与CSFV、PRRSV、PCV2、PRV等抗体阳性猪血清无交叉反应，说明特异性好；批内与批间变异系数均低于10%，表明重复性好。利用p22-ELISA方法检测了263份临床猪血清样品，与商品化ASFV抗体ELISA检测试剂盒的符合率为97.7%。【结论】本研究基于原核表达的p22截短体蛋白建立了用于检测ASFV抗体的间接ELISA方法，该方法特异性强、灵敏度高、重复性好，为ASFV感染诊断和流行病学调查提供了技术支撑。

【目的】分析A型塞内卡病毒（Seneca virus A，SVA）感染猪肾上皮细胞（PK-15）后环状RNA （circular RNA，circRNA）表达谱的变化，探究circRNAs在SVA感染过程中发挥的潜在调控作用。【方法】本研究基于Illumina HiSeq 2000平台对SVA感染及对照PK-15细胞circRNAs转录组进行测序，并对差异表达circRNAs的来源基因进行GO功能及KEGG通路富集分析，通过实时荧光定量PCR对新发现的circRNAs进行表达水平鉴定。【结果】转录组测序结果显示，SVA感染组、PK-15细胞对照组中共有432种circRNAs被发现。在SVA感染PK-15细胞中，87种circRNAs表达水平相对对照组PK-15细胞显著上调，74种circRNAs表达水平显著下调。对差异表达circRNAs的来源基因进行GO功能注释分析表明，SVA感染组差异表达circRNAs来源基因主要富集于核仁、细胞器膜和细胞大分子代谢、发育等生理过程。KEGG通路富集结果显示，SVA感染组差异表达circRNAs来源基因主要富集于胞吞过程、cAMP信号通路、Rap1信号通路、Ras信号通路。对6种新发现的显著差异表达的circRNAs进行实时荧光定量PCR验证，结果显示，其表达水平与高通量测序结果趋势一致。【结论】本研究首次对SVA感染PK-15细胞的circRNAs表达谱进行差异分析，发现差异表达的circRNAs广泛参与动物机体大分子代谢、胞吞及细胞增殖、黏附、抗病毒过程，为进一步探究circRNAs在SVA感染过程中的分子机制提供了理论依据。

【目的】根据鸭疫里氏杆菌（Riemerella anatipestifer，RA）血清1型、2型贵州流行株制备二价灭活疫苗，为鸭疫里氏杆菌病的防控及疫苗研制提供研究资料。【方法】以血清1型RA （RA-G06株）、血清2型RA （RA-HS01株）地方流行株为菌种，通过涂板法测定菌株生长曲线，利用改良寇氏法计算菌株对鸭的半数致死量（median lethal dose，LD₅₀），将2株菌培养至终浓度为1×10¹⁰ CFU/mL后等比例混合，以卡波姆为佐剂制备二价灭活疫苗，经疫苗质量检验后进行雏鸭免疫试验；通过检测免疫鸭血清中特异性抗体水平和攻毒保护试验评价疫苗的保护率，对攻毒试验鸭心脏、肝脏、脾脏和脑组织进行组织病理学观察。【结果】RA-G06株和RA-HS01株均在培养12 h时到达峰值，活菌数分别为2.1×10¹¹和3.3×10¹¹ CFU/mL，LD₅₀分别为1.44×10¹⁰和2.63×10⁸ CFU/mL；制备的疫苗安全性良好，能诱导鸭产生体液免疫；RA-G06株攻毒保护试验结果显示，自研疫苗和商品疫苗保护率均为90%；RA-HS01株攻毒试验结果显示，自研疫苗保护率为90%，商品疫苗保护率为80%；组织病理学结果显示，免疫后各疫苗组对鸭心脏、肝脏、脾脏和脑组织能提供较好的保护效果，且自研疫苗组优势明显。【结论】利用贵州地区流行的RA 1型、2型菌株所制备的卡波姆佐剂灭活疫苗具有明显的免疫效果，能对贵州地区1型、2型鸭疫里氏杆菌病的防控起到重要作用。

【目的】获取ASFV p37蛋白，并制备抗ASFV p37蛋白的多克隆抗体，为ASFV p37蛋白结构和功能研究提供材料。【方法】应用生物信息学工具对ASFV HLJ/2018（GenBank登录号：MK333180.1） p37蛋白进行分析，设计合成p37基因，并构建pET32a-p37重组质粒。将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，经IPTG诱导表达后，通过SDS-PAGE对重组蛋白的可溶性进行分析。收集菌体进行超声破碎，分离沉淀并使用8 mol/L尿素变性后离心，用0.45 μm滤膜过滤离心后的上清，使用镍亲和层析柱纯化蛋白，通过SDS-PAGE、Western blotting对其纯化效果及特异性进行验证。将纯化后的p37蛋白按照50 μg/只免疫小鼠，制备抗ASFV p37蛋白多克隆抗体。利用间接ELISA方法测定制备的多克隆抗体效价；通过Western blotting、间接免疫荧光试验检测该多克隆抗体的特异性。【结果】生物信息学分析表明，p37蛋白为稳定亲水性蛋白，无跨膜区和信号肽。二级结构主要含有α-螺旋（45.28%）、延伸链（15.09%）、无规则卷曲（31.54%）。SDS-PAGE、Western blotting结果显示，经IPTG诱导后，成功表达重组蛋白p37，大小62 ku左右，主要以包涵体形式存在，且能与His单克隆抗体发生反应。间接ELISA结果显示，制备的鼠源多克隆抗体效价为1：256 000。Western blotting结果显示，在42 ku左右出现了特异性条带；间接免疫荧光显示出了特异性的红色荧光，表明该多克隆抗体能与重组杆状病毒表达的p37蛋白发生反应，具有较好的特异性。【结论】本试验成功表达并纯化了ASFV p37蛋白，制备了抗ASFV p37蛋白多克隆抗体，重组蛋白具有较好的免疫原性，能产生较强的免疫反应，为后续ASFV p37蛋白结构功能研究、抗体及相关疫苗研发奠定基础。

【目的】制备鸡干扰素诱导蛋白含三角形四肽重复5（IFIT5）多克隆抗体，以探究IFIT5对J型禽白血病病毒（ALV-J）在鸡胚成纤维细胞（DF-1）内复制的影响。【方法】以感染ALV-J的鸡脾脏组织细胞提取的RNA反转录获得的cDNA作为模板，对IFIT5基因进行PCR扩增，利用重组酶将纯化后的PCR产物和线性化载体进行连接，构建重组质粒pET-28a-IFIT5和pcDNA5-flag-IFIT5并测序。将测序正确的重组质粒pET-28a-IFIT5转化大肠杆菌BL21感受态细胞进行诱导表达，表达的融合蛋白His-IFIT5纯化后免疫6周龄BALB/c雌鼠制备多克隆抗体，通过Western blotting鉴定抗体的特异性，利用间接ELISA测定抗体的效价。将测序正确的重组质粒pcDNA5-flag-IFIT5转染DF-1细胞，24 h后接种ALV-J，通过Western blotting检测DF-1细胞中过表达IFIT5对ALV-J复制的影响。【结果】试验成功扩增到大小为1 440 bp的IFIT5基因，并成功构建重组质粒pET-28a-IFIT5和pcDNA5-flag-IFIT5。pET-28a-IFIT5可以表达约56 ku的可溶性蛋白His-IFIT5，Western blotting结果显示，制备的鼠抗IFIT5蛋白多克隆抗体能特异性识别DF-1细胞中过表达的IFIT5蛋白，效价为1：32 000。pcDNA5-flag-IFIT5能在DF-1细胞中高效表达，且在DF-1细胞中过表达IFIT5可以促进ALV-J复制。【结论】本研究制备的鼠抗IFIT5蛋白多克隆抗体具有较高的反应性和特异性；在DF-1细胞中过表达IFIT5可以促进ALV-J复制。本试验结果为深入研究IFIT5蛋白的生物学功能提供参考。

寄生原虫是一类单细胞真核生物，是人和动物疾病的重要病原之一，给人类健康和畜牧业发展造成了严重的危害。DNA解旋酶是一类参与几乎所有生物DNA代谢的重要解旋酶，目前原虫DNA解旋酶的研究主要集中在恶性疟原虫，且被报道的DNA解旋酶多为人类或酵母的同源物，其保守基序与人类、酵母等都存在差异，是研究抗原虫药物的重要潜在靶标。笔者主要综述了经典解旋酶的保守结构域及其功能特点，介绍了各个解旋酶的极性与偏好底物等生化特性，汇总了已报道原虫DNA解旋酶的种类。目前报道的DNA解旋酶大多集中在恶性疟原虫，其中疟原虫含18种，利士曼原虫含3种，布氏锥虫和兔脑原虫均含2种，弓形虫含1种。同时介绍了目前原虫中较为引人关注DNA解旋酶：RecQ家族、DEAD-box家族、UvrD解旋酶家族和RuvB家族的功能研究进展，其中DEAD-box家族中有3种疟原虫特异性解旋酶PfPSH1/H2/H3并未在宿主人类中发现相似物，另一种解旋酶UvrD则与人类、小鼠、秀丽隐杆线虫等无同源性，而与细菌、真菌等同源性较高。笔者对原虫DNA解旋酶的基本特性和功能进行综述，阐述了目前原虫DNA解旋酶的研究进展及其作为药物靶标的可能性，以期为抗原虫药物靶标筛选及原虫病的防控提供新的研究思路。

【目的】筛选腹泻仔猪中携毒力基因且多重耐药的大肠杆菌菌株，评估中药水提物对该菌株的抑菌活性，并探索中药抑菌机制。【方法】通过PCR方法与Kirby-Bauer （K-B）药敏纸片法评估临床大肠杆菌菌株的肠毒素基因携带情况和耐药性；通过微量肉汤稀释法评估中药水提物对多重耐药大肠杆菌菌株的抑菌活性，确定最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration，MIC）和最小杀菌浓度（minimal bactericidal concentration，MBC）；通过电导率仪以及相关试剂盒检测评估石榴皮水提物对多重耐药菌株作用不同时间后菌液电导率、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，AKP）含量及菌体内ATP含量的变化；通过SDS-PAGE和蛋白含量检测评估菌体内可溶性蛋白的含量变化；通过扫描电镜观察大肠杆菌形态变化。【结果】PCR检测14株临床大肠杆菌中肠毒素基因携带率达到78.57%，抗生素药敏试验结果显示，所有菌株至少对2种抗生素耐药，均属于多重耐药菌株。中药药敏试验结果显示，黄连、黄芩、石榴皮水提物对多重耐药菌株抑菌活性较好，其中石榴皮水提物的MIC和MBC分别为31.25和62.5 mg/mL。石榴皮水提物在1/2MIC和MIC浓度下能显著抑制质控菌株和多重耐药菌株的生长繁殖。在石榴皮水提物作用大肠杆菌3 h内，菌液电导率相比于对照组极显著上升（P<0.01）。AKP与ATP检测结果显示，与对照组相比，石榴皮水提物在作用大肠杆菌6 h内，菌液中AKP含量极显著增加（P<0.01），菌体内ATP含量极显著降低（P<0.01）。SDS-PAGE和蛋白含量检测结果显示，随着石榴皮水提物刺激时间增加，菌体内可溶性蛋白含量减少。扫描电镜结果显示，石榴皮刺激后菌体形态发生碎裂和溶解。【结论】本研究结果表明，石榴皮水提物能显著抑制多重耐药且携带肠毒素基因的大肠杆菌生长，为临床治疗大肠杆菌性仔猪腹泻提供理论参考和药物开发依据。

【目的】利用网络药理学和分子对接技术发现莪术醇抗脑心肌炎病毒（Encephalomyocarditis virus，EMCV）的作用靶点及机制。【方法】利用PharmMapper、GeneCards数据库获得莪术醇抗EMCV的相关靶点；通过Cytoscape 3.7.2软件、STRING和DAVID数据库构建靶蛋白互作（PPI）网络并筛选关键靶点，对靶点进行GO功能和KEGG通路富集分析，并构建莪术醇抗EMCV靶点-通路网络；通过AutoDock Vina 1.1.2分析莪术醇与靶蛋白的结合能及结合模式。【结果】网络药理学分析结果显示，莪术醇抗EMCV的潜在靶点有9个，其中丝裂原活化激酶14（mitogen-activated protein kinase 14，MAPK14）、信号转导与转录激活因子1（signal transducer and activator of transcription 1，STAT1）、白蛋白（albumin，ALB）、白细胞介素2（interleukin 2，IL2）可能是莪术醇抗EMCV的核心靶点，所得靶点参与C型凝集素受体信号通路、神经营养素信号通路和JAK-STAT信号通路等代谢通路，功能涉及调节炎症反应细胞因子的产生、蛋白激酶活性和药物结合等；分子对接结果显示，4种核心靶蛋白与莪术醇之间存在较强的结合能，均存在疏水形式的结合，其中ALB、STAT1和IL2与莪术醇之间还存在氢键结合。【结论】本研究结果表明，MAPK14、STAT1、ALB和IL2是莪术醇发挥抗EMCV作用的潜在靶点，本研究为莪术醇作为抗EMCV药物的研发提供理论依据和线索。

【目的】探究辣蓼黄酮正丁醇部位（N-butanol fraction of Polygonum hydropiper flavonoids，FNB）对猪伪狂犬病毒（Pseudoabies virus，PRV）体外感染猪肺泡巨噬细胞（3D4/2细胞）氧化应激相关因子的影响，旨在初步分析FNB的抗氧化效果。【方法】采用10^-1至10^-10浓度PRV体外感染猪肾细胞（PK15细胞），计算病毒半数组织培养感染剂量（TCID₅₀）；将3D4/2细胞分为BC组、DMSO组、PRV组、FNB 1、FNB2和FNB3组，BC组用DMEM培养液处理，其余各组用感染复数（multiplicity of infection，MOI）=0.1 RPV处理，孵育2 h后，PRV组添加DMEM培养液，DMSO组及FNB1、FNB2、FNB3组分别添加0.05% DMSO及12.5、25、50 μg/mL FNB的DMEM培养液。培养4、8、12、24 h后，分别收取各组细胞培养液上清和细胞，通过试剂盒测定细胞培养液上清中一氧化氮（NO）的含量、细胞内活性氧（ROS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、黄嘌呤氧化酶（XOD）、髓过氧化物酶（MPO）的活性和丙二醛（MDA）的含量。【结果】PRV的TCID₅₀为10^-8.25/0.1 mL；与BC组相比，PRV组上清中NO水平在4、8 h时极显著降低（P<0.01），在12、24 h时极显著升高（P<0.01），细胞内ROS在4 h时显著降低（P<0.05），8~24 h时显著或极显著升高（P<0.05；P<0.01），iNOS和XOD活性在8~24 h时显著或极显著升高（P<0.05；P<0.01），MPO活性在4~24 h时显著升高（P<0.05），MDA含量在4 h时显著降低（P<0.05），12~24 h时显著升高（P<0.05）。与PRV组相比，FNB2组NO含量在4~8 h时显著或极显著升高（P<0.05；P<0.01），在12 h时显著降低（P<0.05），FNB3组在24 h时极显著升高（P<0.01）；细胞内ROS水平在4 h时极显著升高（P<0.01），8~24 h时极显著降低（P<0.01）；FNB1组iNOS活性在4 h时显著升高（P<0.05），3个FNB组iNOS活性在8~24 h时显著或极显著升高（P<0.05；P<0.01），MPO和XOD活性在4~24 h时显著或极显著降低（P<0.05；P<0.01），MDA含量在4 h时升高，8 h时FNB2、FNB3组MDA含量显著降低（P<0.05），24 h时FNB1、FNB2组MDA含量显著降低（P<0.05）。【结论】FNB可以通过干预氧化应激相关因子的分泌调节细胞氧化应激水平，维持氧化与抗氧化的平衡，结果可为辣蓼黄酮正丁醇部位的开发应用提供理论依据。

【目的】从奶牛瘤胃中分离具有抗氧化能力且耐受性好的芽孢杆菌，为牛源益生菌作为抗氧化添加剂使用提供理论依据及参考。【方法】采集3头成年荷斯坦奶牛瘤胃内容物，通过细菌分离纯化、形态观察、生化检测及16S rDNA分子检测进行鉴定，同时检测筛选菌株的超氧自由基和羟自由基清除率、耐酸、耐胆盐能力及对抗生素的耐药性。【结果】从奶牛瘤胃液中共获得了12株菌，通过特异性培养基与革兰氏染色共筛选出5株芽孢杆菌（X-1~X-5）。对5株芽孢杆菌进行分子鉴定，确定X-1为热噬淀粉芽孢杆菌，X-2为短小芽孢杆菌，X-3为解蛋白芽孢杆菌，X-4为枯草芽孢杆菌，X-5为沙福芽孢杆菌。抗氧化能力检测结果显示，5株菌均具有一定的抗氧化能力，X-5菌株抗氧化能力最高，超氧自由基和羟自由基清除率分别达到73.81%和73.54%。当pH为2.5时，5株芽孢杆菌存活率均在25%以上；胆盐浓度为0.6%时，5株芽孢杆菌存活率均在60%以上，说明菌株具有良好的耐受性。药敏试验结果显示，试验分离出来的大多数菌株对氧氟沙星、呋喃妥因、红霉素等高度敏感；对头孢呋辛、头孢噻肟、链霉素等耐受；对卡那霉素、环丙沙星、氨苄西林等中度敏感。【结论】本研究分离的牛源芽孢杆菌具有抗氧化能力，部分菌株具有很好的耐酸、耐胆盐特性，为牛源芽孢杆菌作为抗氧化添加剂使用提供理论依据及参考。

【目的】了解中国不同地区鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum，MG）的流行和耐药情况，为禽支原体病的监测与防控提供科学依据。【方法】在广东、福建和安徽3个省份疑似MG感染的养殖场采集的43份气囊样品中分离培养和纯化MG流行菌株，并对其进行培养特性观察、生化及染色鉴定、血清学特异性鉴定、PCR测序分析、致病性试验和对常见抗菌药物敏感性试验。【结果】分离到3株疑似MG，均可使培养基颜色变黄，在固体培养基上呈典型"煎蛋"样菌落，可发酵葡萄糖，不水解精氨酸，不能利用尿素，符合MG培养特性。姬姆萨染色观察菌体形态、血清学特异性鉴定结果进一步证实分离株为MG。mgc2基因测序结果显示，3株分离株与强毒代表株亲缘关系更近。致病性试验结果显示，3株分离株与MG感染临床症状一致，发病率为70%~90%，致病力较强。药物敏感性试验结果显示，3株分离株均对恩诺沙星、替米考星、土霉素、氟苯尼考耐药，对泰万菌素和沃尼妙林均敏感，对大观霉素、金霉素、泰乐菌素和泰妙菌素的敏感性具有地域差异：福建株对大观霉素表现明显耐药，安徽株对泰妙菌素表现耐药，而广东株对大观霉素、金霉素和泰妙菌素均较敏感。【结论】本试验成功分离到3株MG，致病力较强，且均存在一定程度耐药，对药物的敏感程度有地区性差异，今后仍需加强各地区MG的药物敏感性监测，减少耐药性的产生与扩散。

【目的】预测五参顺脉汤治疗动脉粥样硬化的潜在靶点及作用机制，为五参顺脉汤临床应用提供参考依据。【方法】通过中药系统药理学分析平台（TCMSP）数据库筛选五参顺脉汤抗动脉粥样硬化活性成分及作用靶点，通过GeneCards、OMIM数据库获取动脉粥样硬化靶点并统一使用UniProt数据库进行标准化，使用R语言脚本获取两者交集靶点；采用Cytoscape 3.9.1软件建立药物-成分-靶点网络图并进行拓扑学属性分析；将交集靶点上传至STRING数据库获得蛋白-蛋白互作（PPI）关系网络，并在DAVID平台中进行GO功能和KEGG通路富集分析。采用AopE^-/-雄鼠进行试验验证，HE染色观察主动脉病变情况，ELISA检测单核细胞趋化因子-1（MCP-1）、白细胞介素-6（IL6）、IL1B、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。【结果】五参顺脉汤中共有活性成分124个，获得靶点122个，动脉粥样硬化靶点4 711个，两者交集靶点98个。拓扑学分析显示，五参顺脉汤治疗动脉粥样硬化的核心成分为槲皮素、β-谷甾醇、豆甾醇、木犀草素，核心靶点为环氧合酶-1（PTGS1）、类固醇受体激活蛋白2抗体（NOCA2）、猴丝氨酸蛋白酶1（PRSS1）等。GO功能富集分析中生物过程得到321个条目（P<0.01），主要涉及对脂多糖的反应、对肿瘤坏死因子的反应、脂肪酸代谢过程等；分子功能得到93个条目（P<0.01），主要涉及膜筏、膜微域、突触膜等；细胞组分得到45个条目（P<0.01），主要涉及DNA结合转录因子结合、RNA聚合酶Ⅱ特异性DNA结合转录因子结合、核受体的活动等。KEGG通路富集分析中共得到129条信号通路（P<0.01），如癌症通路、脂质和动脉粥样硬化通路、流体剪切应力和动脉粥样硬化通路等，大多与调节免疫性炎症和动脉粥样硬化有关。血脂四项检测结果显示，与模型组相比，药物组小鼠血清中胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平显著下降（P<0.05），HDL-C升高（P>0.05）；HE染色结果显示，给药组主动脉斑块明显减少，脂质侵润减轻，泡沫细胞数量减少；ELISA检测结果显示，在药物作用下主动脉组织匀浆中炎症因子MCP-1、IL6、IL1B、TNF-α含量均显著降低（P<0.05）。【结论】五参顺脉汤可通过多成分、多靶点、多通路发挥治疗动脉粥样硬化的作用，其活性成分槲皮素、β-谷甾醇、豆甾醇、木犀草素可能通过作用于PTGS1、乙酰胆碱酯酶（ACHE）、腺苷（AR）等靶点产生炎性控制及免疫调节作用。

佐剂作为疫苗的重要组成部分，其自身的安全性及对疫苗的免疫增强效果受到广泛重视。动物疫苗佐剂种类较多，包括铝佐剂、油乳佐剂和脂质体佐剂等。但由于可应用的佐剂有限，疫苗的需求量增大，因此寻求更加安全有效的疫苗佐剂成为新的研究热潮。中药具有易获取、毒性低和免疫活性强等特点，有潜力成为新型疫苗佐剂。笔者对中药有效成分的佐剂活性、联合疫苗后的免疫调节效果及作用机制进行综述，阐明中药有效成分作为动物疫苗佐剂的可能性及研究进展，为新型佐剂的研制提供理论依据。

【目的】探究昆明轿子雪山自然保护区死亡麂子体内潜在微生物的生物学特性，以揭示其与该麂子死亡是否存在相关性，同时为昆明轿子雪山自然保护区的微生物多样性提供数据支持。【方法】无菌采集死亡麂子的肩部肌肉组织，对其进行细菌分离培养，采用革兰氏染色镜检、生化试验及16S rRNA基因扩增鉴定后进行序列比对并构建系统发育树，确定分离菌株种类并对分离菌株进行药敏试验和动物回归试验。【结果】分离菌株在胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）和血琼脂培养基上菌落形态为圆形、边缘整齐、表面光滑，呈乳白色；在麦康凯培养基（MAC）上不生长，革兰氏染色镜检见紫色杆菌。生化试验结果显示，分离菌株不能发酵蔗糖、棉子糖、山梨醇等；苯丙氨酸、鸟氨酸、赖氨酸、V-P试验、葡萄糖产气阳性。16S rRNA基因序列和系统发育树分析发现，该菌株与GenBank数据库中登录的麦芽香肉杆菌菌株MMF-23（GQ304931.1）相似性达100%。结合形态学、生化特征等，鉴定分离菌株为麦芽香肉杆菌，命名为BJT86，并将16S rRNA序列提交GenBank，获得登录号为ON966116.1。药敏试验结果显示，分离菌株对青霉素、阿莫西林、哌拉西林等6种抗菌药表现为耐药，对头孢唑啉、头孢噻肟、头孢舒巴坦等18种抗菌药敏感。动物回归试验表明分离菌株无致病性。【结论】本试验从昆明轿子雪山自然保护区死亡麂子肩部肌肉组织首次成功分离得到1株麦芽香肉杆菌，可为食品安全提供新的参考方向，同时为益生菌制剂的制备提供基础数据。

【目的】运用网络药理学和分子对接方法研究山楂调节氧化应激的活性成分及潜在作用机制。【方法】通过TCMSP数据库检索山楂的化学成分及其作用靶点；在Uniprot数据库中对所得靶点进行标准基因名转化。利用GeneCards和OMIM数据库筛选氧化应激相关靶点。通过Venny 2.1.0软件获得山楂和氧化应激的交集靶点；借助STRING数据库和Cytoscape 3.8.0软件构建山楂-主要活性成分-靶点网络和蛋白-蛋白互作网络，筛选核心靶点，随后利用AutoDockTools 1.5.7和AutoDock Vina 1.1.2软件进行分子对接。应用DAVID数据库进行GO功能富集和KEGG通路注释分析，结果由Pymol软件进行可视化作图。【结果】筛选获得槲皮素、山奈酚、异鼠李素、豆甾醇、谷甾醇、表儿茶素等山楂的主要活性成分。基于主要活性成分和氧化应激分别筛选获得185和9 647个靶点，其中山楂与氧化应激交集靶点共171个，如丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶AKT （serine/threonine-protein kinase AKT，AKT1）、细胞肿瘤抗原p53（cellular tumor antigen p53，TP53）、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）、白细胞介素6（interleukin 6，IL6）、血红素加氧酶1（heme oxygenase 1，HMOX1）、髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）、醌氧化还原酶1（NAD （P） H：quinone oxidoreductase，NQO1）等。分子对接结果显示，山楂的6个主要活性成分与筛选靶点具有较好的结合活性，其中NQO1与豆甾醇、谷甾醇，AKT1与槲皮素、山奈酚、表儿茶素结合活性最好。GO功能富集筛选出987条目，其中生物过程主要包括RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录正调控、细胞因子介导信号通路、正调控转录DNA模板化等。通过KEGG通路注释得到177条信号通路，包括TNF、IL17、丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）等信号通路。【结论】本研究初步揭示了山楂可通过多成分、多靶点、多通路调节机体氧化应激，为进一步研究山楂精准抗氧化的作用机制提供了科学依据。

【目的】研究两种通风模式下杭州地区规模化猪场舍内环境参数及其分布规律，筛选出适合本地区推广的通风模式。【方法】选取杭州地区具有代表性的横向通风和纵向通风两种通风模式下育肥舍为研究对象，开展了早、中、晚3个不同时间点，进风口、舍中央和排风口3个不同位置的热环境参数、有害气体浓度的监测，持续监测1周。分析不同时间点和舍内不同位置对热环境参数（温度、相对湿度、风速）以及有害气体（氨气（NH₃）和硫化氢（H₂S））浓度的影响，并对两种模式下的热环境参数及有害气体浓度进行比较分析；采用空气沉淀法收集舍内环境中的细菌，并对细菌进行培养及统计分析，比较两种模式下育肥舍中细菌数量差异。【结果】两种通风模式下育肥舍相对湿度均低于国家标准，位置和各时间点对相对湿度影响不大，其中纵向通风舍内的相对湿度显著高于横向通风模式（P<0.05）。两种通风模式舍内平均温度没有显著性差异（P>0.05），舍内中午温度显著高于早、晚（P<0.05），位置对纵向通风舍内温度影响较大。纵向通风舍内平均风速为（1.09±0.42） m/s，符合国家标准且极显著高于横向通风模式（P<0.01），风速受舍内位置的影响，各时间点对其影响不大。两种通风模式下猪舍空气环境中有害气体浓度均在国家标准范围内，但纵向通风舍内NH₃和H₂S浓度均显著低于横向通风模式（P<0.05），各时间点H₂S、NH₃浓度差异均不显著（P>0.05），舍内不同位置对有害气体浓度分布影响较大，进风口位置有害气体浓度显著低于舍中央位置和排风口位置（P<0.05）。纵向通风舍内空气中细菌总数符合国家标准且显著低于横向通风模式（P<0.05）。【结论】纵向通风模式下育肥舍内的总体环境优于横向通风模式，在本区域生产应用中，育肥舍的设计倾向于推广纵向通风模式。