猪伪狂犬病病毒多克隆抗体的制备及免疫学活性研究

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.06.014

《中国畜牧兽医》---唯一指定的官方网站 ›› 2015, Vol. 42 ›› Issue (6): 1417-1423.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.06.014

猪伪狂犬病病毒多克隆抗体的制备及免疫学活性研究

孟日增, 刘韬, 马文晨, 王伟琳, 吴连鹏, 罗雁非

吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心, 长春 130062

收稿日期:2014-11-14 出版日期:2015-06-20 发布日期:2015-07-23
通讯作者: 孟日增 E-mail:mrz1975@163.com
作者简介:孟日增(1975-),男,山西朔州人,博士,高级兽医师,研究方向:进出境动物疫病检疫
基金资助:
国家质检公益性项目(201010063)

Preparation of Polyclonal Antibodies against Swine Pseudorabies Virus and Study on the Immunological Activity

MENG Ri-zeng, LIU Tao, MA Wen-chen, WANG Wei-lin, WU Lian-peng, LUO Yan-fei

Inspection and Quarantine Technical Center, Jilin Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Changchun 130062, China

Received:2014-11-14 Online:2015-06-20 Published:2015-07-23

摘要/Abstract

摘要： 本研究旨在获得抗猪伪狂犬病病毒(PRV)闽A株的多克隆抗体,为PRV的治疗与检测提供理论基础.本研究在PK-15细胞上进行PRV的增殖,测定其TCID₅₀为10^-7.372,粗提蛋白后,测定PRV蛋白浓度为3.6 mg/mL.试验选用25只健康、雄性、体重为2.5 kg±0.2 kg的新西兰大白兔为试验动物,用获得的PRV为抗原免疫后,获得抗PRV多克隆抗体.测定其抗血清效价为1:32 000,抗原包被稀释度为1:40,最佳包被条件为4 ℃ 12 h,最佳封闭时间为1 h,酶标二抗最佳工作稀释度为1:8 000.细胞病变中和试验结果表明,本研究制备的PRV抗血清在1:16的稀释情况下能保护50%的PK-15细胞免受PRV的攻击,而阴性血清不能保护PK-15细胞免受PRV的感染.结果表明本研究成功制备了PRV多克隆抗体.

关键词: 伪狂犬病病毒(PRV); 多克隆抗体; PK-15细胞

Abstract: This study was aimed to obtain polyclonal antibody against swine pseudorabies virus (PRV) Min A strain,and provide a theoretical basis for the study of the treatment and detection of PRV.This study was performed on PK-15 cell and proliferation of PRV was measured as TCID₅₀ 10^-7.372,the protein concentration of PRV was measured as 3.6 mg/mL.Choosing five healthy male rabbits (2.5 kg±0.2 kg) as experimental animals and using PRV obtained as the antigen,we got polyclonal antibody against PRV.Antiserum titer was 1:32 000,antigen coating dilution was 1:40,the best coating conditions was 4 ℃ 12 h,the best blocking time was 1 h,the best working dilution of enzyme labled antibody was 1:8 000,the result of cell lesions neutralization test showed that PRV antiserum prepared in this assay at 1:16 dilution could protect 50% of PK-15 cells from being infected by PRV,and negative serum couldn't protect PK-15 cells from being infected by PRV.The study successfully prepared polyclonal antibodies against PRV.

Key words: pseudorabies virus (PRV); polyclonal antibody; PK-15 cell

中图分类号:

S852.4

孟日增, 刘韬, 马文晨, 王伟琳, 吴连鹏, 罗雁非. 猪伪狂犬病病毒多克隆抗体的制备及免疫学活性研究[J]. 《中国畜牧兽医》---唯一指定的官方网站, 2015, 42(6): 1417-1423.

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