鸡毒支原体LAMP可视化检测方法的建立

中国畜牧兽医

鸡毒支原体LAMP可视化检测方法的建立

罗思思, 谢芝勋, 邓显文, 谢志勤, 庞耀珊, 谢丽基, 刘加波, 范晴, 彭宜

广西兽医研究所, 广西畜禽疫苗新技术重点实验室, 广西南宁 530001

收稿日期:2012-03-07 出版日期:2012-09-20 发布日期:2012-09-18
通讯作者: 谢芝勋,研究员。E-mail:xiezhixun@126.com E-mail:xiezhixun@126.com
作者简介:罗思思(1985－),女,广西人,硕士,主要研究动物免疫学与病毒学。
基金资助:
广西特聘专家专项经费(2011B020);新世纪百千万人才工程国家级人选专项经费(945200603)。

Development of a Loop-Mediated Isothermal Amplification Assay for Visual Detection of Mycoplasma Gallisepticum

LUO Si-si, XIE Zhi-xun, DENG Xian-wen, XIE Zhi-qin, PANG Yao-shan, XIE Li-ji, LIU Jia-bo, FAN Qing, PENG Yi

Guangxi Key Laboratory of Animal Vaccines and New Technology, Guangxi Veterinary Research Institute, Nanning 530001, China

Received:2012-03-07 Online:2012-09-20 Published:2012-09-18

摘要/Abstract

摘要： 为建立一种鸡毒支原体(MG)的快速检测方法,本研究根据GenBank中MG的基因保守序列,设计1套特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,优化反应条件,建立了MG LAMP的可视化检测方法。该方法的敏感性可达10 fg/μL,高于常规PCR方法100倍;其特异性好,对其他的鸡常见病原体的检测结果均为阴性。MG LAMP反应只需一个可控温的水浴锅,在1 h内完成全部反应,通过肉眼观察颜色直接判定结果。本研究建立的LAMP方法具有灵敏度高、特异性好、操作简便的优点,可用于MG感染的快速检测。

关键词: 鸡毒支原体; 环介导等温扩增; 可视化检测

Abstract: A loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay was developed for detection of mycoplasma gallisepticum(MG). According to the sequences of MG in GenBank, six primers were designed, and the reaction conditions were optimized. The results showed that the detection limit of this LAMP method was 10 fg/μL, which was 10²-fold higher than the routine PCR. There was no cross-reactivity with the other pathogen of chicken. The amplification could be finished by water bath within 1 h, and the presence of MG could be detected and visualized by naked eyes. These results suggested that this LAMP assay was a simple and specific method for rapid detection of MG of clinical samples.

Key words: mycoplasma gallisepticum; LAMP; visual detection

中图分类号:

罗思思, 谢芝勋, 邓显文, 谢志勤, 庞耀珊, 谢丽基, 刘加波, 范晴, 彭宜. 鸡毒支原体LAMP可视化检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医.

LUO Si-si, XIE Zhi-xun, DENG Xian-wen, XIE Zhi-qin, PANG Yao-shan, XIE Li-ji, LIU Jia-bo, FAN Qing, PENG Yi. Development of a Loop-Mediated Isothermal Amplification Assay for Visual Detection of Mycoplasma Gallisepticum[J]. .

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