副猪嗜血杆菌aroA基因的克隆与序列分析及2种三重PCR检测方法的建立

中国畜牧兽医

副猪嗜血杆菌aroA基因的克隆与序列分析及2种三重PCR检测方法的建立

牟和平, 王兴美, 叶亚琼, 李家伟, 李玉谷

华南农业大学兽医学院,广东广州 510642

收稿日期:2012-03-05 出版日期:2012-08-20 发布日期:2012-08-24
通讯作者: 李玉谷 E-mail:liyugu@scau.edu.cn
作者简介:牟和平(1985-),男,四川人,硕士生,研究方向:动物组织胚胎学。

Isolation and Identification of Haemophilus parasuis, Cloning and Sequence Analysis of aroA Gene and Institution of Two Program of Triplex PCR Assay

MU He-ping, WANG Xing-mei, YE Ya-qiong, LI Jia-wei, LI Yu-gu

College of Veterinary Medicine, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China

Received:2012-03-05 Online:2012-08-20 Published:2012-08-24

摘要/Abstract

摘要： 本试验对分离的5株副猪嗜血杆菌进行了"卫星" 生长试验、生化鉴定和PCR检测。通过对aroA基因序列进行分析,发现这5株菌同标准菌株相比,其核苷酸序列相似性为96.3%~99.8%,氨基酸序列相似性为98.2%~99.5%。此外,还建立了分别针对副猪嗜血杆菌(Hps)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)及猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒的三重PCR检测方法;敏感性试验表明,三重PCR最低能检出Hps、PPV、PRV、PCV2的DNA分别为12、16、7.6和6.3 pg。

关键词: 副猪嗜血杆菌; 三重PCR; aroA基因

Abstract: In this study, 5 strains of Haemophilus parasuis(Hps)were identified by ‘satellite’ growing test, biochemical and PCR assay. The results showed that aroA gene of the isolated Hps had a high degree of similarity with classical culture strain in the sequence of nucleotide and amino acid sequence, which was between 96.3% to 99.8% and 98.2% to 99.5% respectively. We implemented two program of triplex PCR assay, one group was used to detect simultaneously infections of Hps, PCV2 and PPV, the other group was developed to detect the PCV2, PPV and PRV. The sensitivity tests indicated that the triplex PCR assay may be used for detecting Hps, PPV, PRV and PCV2 of 10⁵ dilute strength; the DNA minimun detectable quantity of Hps, PPV, PRV, PCV2 was 12, 16, 7.6 and 6.3 pg respectively.

Key words: Haemophilus parasuis; triplex PCR assay; aroA gene

中图分类号:

牟和平, 王兴美, 叶亚琼, 李家伟, 李玉谷. 副猪嗜血杆菌aroA基因的克隆与序列分析及2种三重PCR检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医.

MU He-ping, WANG Xing-mei, YE Ya-qiong, LI Jia-wei, LI Yu-gu. Isolation and Identification of Haemophilus parasuis, Cloning and Sequence Analysis of aroA Gene and Institution of Two Program of Triplex PCR Assay[J]. .

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