畜禽源3种革兰氏阴性杆菌多重PCR检测方法的建立与应用

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.03.003

›› 2016, Vol. 43 ›› Issue (3): 577-584.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.03.003

畜禽源3种革兰氏阴性杆菌多重PCR检测方法的建立与应用

马光强¹, 刘丽娟¹, 龙丹丹¹, 岳筠², 李毅², 文明^1,3, 程振涛^1,3, 周碧君^1,3

1. 贵州大学动物科学学院, 贵阳 550025;
2. 贵州省动物疫病预防控制中心, 贵阳 550008;
3. 贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点实验室, 贵阳 550025

收稿日期:2015-10-08 出版日期:2016-03-20 发布日期:2016-03-30
通讯作者: 程振涛, 周碧君 E-mail:chengzhentao@sohu.com;as.bjzhou@gzu.edu.cn
作者简介:马光强(1987-),男,贵州石阡人,硕士生,研究方向:动物细菌性疫病,E-mail:742975562@qq.com
基金资助:
贵州省农业攻关项目(黔科合NY[2014]3042号);贵州省科技创新人才团队项目(黔科合人才团队[2015]4016号)

Establishment and Application of Multiplex PCR Detection Method for Three Main Gram-negative Bacilli from Livestock and Poultry

MA Guang-qiang¹, LIU Li-juan¹, LONG Dan-dan¹, YUE Jun², LI Yi², WEN Ming^1,3, CHENG Zhen-tao^1,3, ZHOU Bi-jun^1,3

1. College of Animal Science, Guizhou Uiversity, Guiyang 550025, China;
2. Animal Disease Prevention and Control Center in Guizhou Province, Guiyang 550008, China;
3. Key Laboratory of Animal Disease and Veterinary Public Health in Guizhou Province, Guiyang 550025, China

Received:2015-10-08 Online:2016-03-20 Published:2016-03-30

摘要/Abstract

摘要： 为建立一种可准确、快速鉴定畜禽临床病例中3种常见革兰氏阴性杆菌的多重PCR检测方法,本试验针对大肠埃希菌23S rRNA基因、巴氏杆菌KMT基因和沙门氏菌invA基因分别设计合成了1对特异性引物,构建可同时快速鉴别大肠埃希菌、巴氏杆菌和沙门氏菌的多重PCR反应体系,并进行反应条件优化及方法性能评估。结果显示,所建立的方法最佳引物浓度分别为1.0、1.5和1.0 μmol/L,最佳退火温度为56 ℃。性能评价结果显示,所建立的多重PCR检测方法具有较好的特异性和敏感性,其中对沙门氏菌检测敏感性最高,为1.44 pg/μL。对70株革兰氏阴性临床分离细菌进行检测,结果表明,所建立的多重PCR检测方法能实现3种临床分离细菌的快速准确鉴定。本方法的建立为相关临床病例快速诊断及流行病学调查提供了有效的技术支持。

关键词: 多重PCR; 大肠埃希菌; 巴氏杆菌; 沙门氏菌

Abstract: To establish a rapid and accurate multiplex PCR method for the clinical detection of three main Gram-negative bacilli from livestock and poultry in Guizhou province,three pairs of specific primers were designed and synthetized according to 23S rRNA gene of Escherichia coli(E.coli),KMT gene of Pasteurella and invA gene of Salmonella.In this study,A mutiplex PCR reaction system was established for detecting the three pathogens at the same time,and the reaction system was optimized and it's performance was evaluated.The results showed that the best concentration of primers was 1.0,1.5and 1.0 μmol/L,respectively,and the best annealing temperature was 56 ℃.The results of performance evaluation showed that the method had good specificity and sensitivity,the sensitivity of Salmonella could reach to 1.44 pg/μL,was the highest.70 Gram-negative clinical isolated strains were detected by the multiplex PCR and it was proofed that the method could identify the three pathogens rapidly and accurately,and it could provide effective technical for the rapid clinical diagnosis and epidemiological survey.

Key words: multiplex PCR; E.coli; Pasteurella; Salmonella

中图分类号:

S852.61

马光强, 刘丽娟, 龙丹丹, 岳筠, 李毅, 文明, 程振涛, 周碧君. 畜禽源3种革兰氏阴性杆菌多重PCR检测方法的建立与应用[J]. , 2016, 43(3): 577-584.

MA Guang-qiang, LIU Li-juan, LONG Dan-dan, YUE Jun, LI Yi, WEN Ming, CHENG Zhen-tao, ZHOU Bi-jun. Establishment and Application of Multiplex PCR Detection Method for Three Main Gram-negative Bacilli from Livestock and Poultry[J]. , 2016, 43(3): 577-584.

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畜禽源3种革兰氏阴性杆菌多重PCR检测方法的建立与应用

Establishment and Application of Multiplex PCR Detection Method for Three Main Gram-negative Bacilli from Livestock and Poultry

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